Quantificação de proteínas pelo método de lowry

Quantificação de proteínas pelo método de Lowry RESUMO O método de Lowry tem como objetivo determinar a concentração de proteínas numa solução com o reagente colorimétrico Folin Ciocalteau. Em condições alcalinas esta substância interage com as proteínas da amostra gerando um complexo de cor azul que pode ser medido num espectrofotômetro no comprimento de onda de 750 nm. A técnica é bastante sensível, apresentando várias desvantagens em relação a outros métodos colorimétricos. No experimento realizado, elaborou-se uma curva padrão com albumina de soro bovino (BSA) a 5 mg/mL como solução padrão, onde obteve-se um fator de calibração médio para calcular a concentração de proteínas na amostra. Utilizou-se leite integral diluído para a quantificação protéica. Em razão de o leite integral possuir grande quantidade de lipídios, a leitura das absorbâncias não foi satisfatória, pois estas biomoléculas podem ter desviado a luz absorvida. INTRODUÇÃO Quantificação de proteínas por espectrofotometria de absorção A espectrofotometria de absorção permite quantificar no espectrofotômetro a quantidade de luz absorvida (absorbância) das proteínas e, consequentemente, medir a concentração dessas biomoléculas em determinado meio. Segundo a lei de Lambert-Beer, a absorbância é diretamente proporcional à concentração da amostra quando uma faixa de luz monocromática atravessa a solução. A determinação da concentração de proteínas em uma solução por espectrofotometria…

identifique absorbância zero. METODO DO BIURETO Para a determinação das proteínas totais, o método do Biureto é o mais usado atualmente, pois além de preciso e exato é de fácil execução, sendo, portanto, bastante empregado para a automação. Biureto é o nome dado ao produto de decomposição da ureia pelo calor. Quando o biureto é tratado com íons cúpricos em solução alcalina, desenvolve cor violeta. As proteínas são determinadas por reação idêntica ao do biureto. O complexo colorido é de…

é especializada para uma determinada função biológica. Além disso, são responsáveis por expressar a maior parte da informação genética.(UFSC) As proteínas desempenham papéis extremamente importantes, na maioria dos processos biológicos, atuando como enzimas, hormônios, neurotransmissores, transportadores através das membranas celulares e outros. Os métodos para a determinação da concentração de proteínas totais são muito variados, no entanto, as metodologias mais utilizadas são as…

mais utilizados são o do biureto9, de Lowry10, do “Coomassie brilliant blue” BG-250 ou reagente de Bradford11, do BCA ou reagente de Smith12, e de absorção de proteínas no ultravioleta13. A seguir serão discutidas as vantagens e desvantagens destas cinco metodologias. O MÉTODO DE BIURETO Princípio As origens do método do biureto podem ser traçadas desde a proposta inicial de Autenrieth, em 1915; posteriormente diversos autores propuseram modificações do mesmo, sendo,…

Proceder de forma semelhante com as soluções padrões (1-50 µg/mL). b) Método Folin-Ciocalteau 0,10 mL de extrato bruto, diluir em água destilada para 50,0 mL. Retirar uma alíquota de 0,5 mL. Adicionar à alíquota 2,5 mL de solução aquosa do reagente de Folin-Ciocalteau a 10% e 2,0 mL de carbonato de sódio a 7,5%. A mistura será mantida por 5 minutos em banho-maria, a 50 °C e registrar a absorvância a 760 nm. Proceder de forma semelhante com as soluções-padrão (1-50 µg/mL) e com o branco…

UTILIZAÇAO DA COLORIMETRIA NA DETERMINACAO DE PROTEINAS Manaus – AM Junho /2013 ANA CAMILA DOS SANTOS SOUSA 21205148 LETÍCIA COUTINHO 21201255 RAYSSA LAMANIERE 21203555 RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA - UTILIZAÇAO DA COLORIMETRIA NA DETERMINACAO DE PROTEINAS Relatório solicitado pela professora Ila Maria, para obtenção de notas parciais para o 3º período. Manaus – AM Junho / 2013 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO…

químicos : Bradford O método de Bradford11 é uma técnica para a determinação de proteínas totais que utiliza o corante de “Coomassie brilliant blue” BG-250. Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve…

métodos geralmente mais utilizados são o do biureto, de Lowry1, do “Coomassie brilliant blue” BG-250 ou reagente de Bradford1, do BCA ou reagente de Smith, e de absorção de proteínas no ultravioleta. A seguir serão discutidas as vantagens e desvantagens destas cinco metodologias. O MÉTODO DE BIURETO Princípio As origens do método do biureto podem ser traçadas desde a proposta inicial de Autenrieth, em 1915; posteriormente diversos autores propuseram modificações do mesmo, sendo,…

químicos :Bradford O método de Bradford11 é uma técnica para a determinação de proteínas totais que utiliza o corante de “Coomassie brilliant blue” BG-250. Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve…

originalmente proposto por Wu35, em 1922, sendo esta metodologia a mais utilizada. O princípio do método baseia-se numa mistura contendo molibdato tungstato e ácido fosfórico ( reagente Folin- Ciocalteau), que sofre uma redução quando reage com proteínas na presença do catalisador, e produz um composto com absorção máxima em 750 nm. Chou e Goldstein 36 e Legler e cols estudaram extensivamente o mecanismo de redução do reagente de Folin- Ciocalteau por proteínas, peptídeos ou…