Quantificação de biomoléculas em solução : método Biureto

Quantificação de biomoléculas em solução : método Biureto

Unidade curricular : Bioquímica

Docente:

Curso: Ciências Forenses e Criminais

Data de realização : 7/4/2014

Objetivos do trabalho
O primeiro objetivo deste trabalho é fazer uma curva de calibração com uma proteína padrão neste caso a BSA (Albumina Sérica Bovina).
O segundo objetivo é quantificar a concentração de proteína numa amostra desconhecida.

Resumo
Esta técnica de Biureto requer uma curva de calibração da proteína padrão (a melhor proteína para utilizar como padrão é uma preparação da proteína com que estamos a trabalhar, no estado puro).
Como esta situação é pouco provável, utilizamos outra proteína como padrão, vamos utilizar a BSA
(Albumina Sérica Bovina).
Para a curva de calibração adiciona-se reagente de Biureto a soluções com diferentes concentrações de BSA, deixando desenvolver a cor ( 30minutos). Na fase seguinte, mede-se a absorvência das soluções a 540 nm (A540) contra um branco contendo reagente de Biureto e tampão. Com os dados de A540 e a concentração das soluções de proteína padrão utilizadas, constrói-se um gráfico de A540 vs.
[proteína]. Às soluções de proteína de concentração desconhecida é adicionado reagente de Biureto e mede-se A540 após o desenvolvimento da cor. A concentração da solução de proteína é determinada a partir da curva padrão de calibração neste caso de 334 μg/ml onde a equação de reta é a seguinte Y=0.0001x+0.0426 . Podemos concluir que existem desvios, pois o coeficiente de correlação (r) = 0,9997, quando deveria ser 0,9999
Um resultado bastante aceitável pois está dentro do esperado.

Detalhes técnicos
A investigação em Bioquímica requer, muitas vezes, a análise quantitativa da concentração de biomoléculas em solução, sejam elas proteínas, glúcidos, lípidos ou outras. A tendência tem sido a de se trabalhar progressivamente com concentrações cada vez menores dos compostos em estudo. E recorresse a métodos espectroscópicos que