Práticas de bioquímica

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE CIÊNCIAS EXATAS DEPARTAMENTO DE QUíMICA SETOR DE BIOQUÍMICA

Bioquímica Experimental
Roteiros de Práticas e Fundamentos Teóricos

2011

ESPECTROFOTOMETRIA
INTRODUÇÃO: A espectrofotometria é uma técnica analítica que avalia a capacidade dos solutos absorverem luz em comprimentos de onda específicos. A medida da luz absorvida permite, entre outras coisas, inferir sobre a concentração do soluto em determinada solução ou material biológico.

Radiação Eletromagnética - Uma radiação eletromagnética, como a luz visível, pode ser descrita (Figura 1): Como uma onda constituída por um componente vetor elétrico e por um componente vetor magnético Como uma série de pacotes discretos de energia (fótons) No primeiro caso, pode-se aplicar à radiação os parâmetros característicos de um movimento ondulatório (comprimento de onda, frequência e número de ondas).

Figura 1: Representação esquemática de uma radiação eletromagnética. O campo elétrico e o campo magnético são perpendiculares entre si e ambos oscilam perpendicularmente à direção de propagação da onda, onde E é o campo elétrico e M o campo magnético.

A energia eletromagnética não precisa de um meio material para se propagar, sendo definida como uma energia que se move na forma de ondas eletromagnéticas à velocidade da luz (300.000 km/s). Dado que a velocidade de propagação das ondas eletromagnéticas é diretamente proporcional à sua frequência e comprimento de onda, esta pode ser expressa por:

Onde:

c=f X

c: velocidade da luz (m/s)

(1)

f: frequência (ciclos/s ou Hz) λ: comprimento de onda (m)

Comprimento de onda (λ) é a distância linear entre dois picos de ondas. As unidades usadas para o comprimento de onda de uma radiação eletromagnética:    1 nanômetro (nm) = 10-9 m 1 micrômetro (µm) = 10-6 m 1 angstrom (Å) = 10-10 m = 10-8 cm

Frequência (f) é o número de ondas completas (ciclos) que passam por um determinado ponto por