Camara de neubauer

Quando se trabalha com bactérias que formam endósporos ou fungos, muitas vezes, deseja-se determinar o número de esporos/ml da suspensão preparada. Uma das formas mais comuns de se obter esta estimativa é através do uso da câmara de Neubauer, também conhecida como hemacitômetro.

A câmara de Neubauer consiste de uma lâmina de microscopia, bem mais alta do que uma lâmina normal, com marcações em quadrantes, de medidas conhecidas. Observando-se ao microscópio, percebe-se que existem três tipos de quadrantes denominados A, B e C, que juntos formam um quadrado maior.

Pode-se notar que estes quadrantes têm sub-divisões diferentes, fazendo com que o critério para escolha do quadrante onde serão contados os esporos, seja o tamanho dos esporos a serem quantificados. Assim, usualmente, esporos muito pequenos são contados no quadrante C, os de tamanho intermediário no quadrante B, enquanto esporos grandes são contados no quadrante A. A área total compreendida pelos 9 quadrantes é de 9 mm2 sendo que cada quadrante (A, B e C) são quadrados de 1 x 1 mm. Ao ser colocada a lamínula (especial para ser usada na câmara de Neubauer) a distância da lamínula até a lâmina (profundidade) mede 0,1 mm, o que permite se obter um volume de 0,1 mm3 em cada quadrante. A suspensão de esporos deve ser preparada utilizando-se 1 gota de Tween 80 (espalhante) para cada 100 ml, o que evita a agregação dos esporos em grupos, que dificulta e compromete a confiabilidade da contagem. Com uma pipeta Pasteur, coleta-se uma pequena alíquota da suspensão preparada, sob agitação constante, e deposita-se em um dos canais laterais ao campo central, a amostra, até que todos os canais interligados estejam completos. Aguarda-se 1 minuto para que haja a sedimentação dos esporos e procede-se a contagem ao microscópio.

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Como proceder a contagem: No quadrante A - contar o número de esporos