Relatório - Extração e caracterização da enzima urease

Páginas: 6 (1415 palavras) Publicado: 31 de outubro de 2013
1 – Extração e caracterização de uma enzima: Urease
2 – OBJETIVO

Compreender a natureza e a ação das enzimas, entender o mecanismo das reações do biureto, reação de Heller, efeito de calor e o efeito de sais de mercúrio sobre as enzimas e reconhecer a especificidade enzimática.

3 – INTRODUÇÃO

As enzimas são proteínas especializadas na catálise de reações biológicas. Elas estão entre asbiomoléculas mais notáveis devido a sua extraordinária especificidade e poder catalítico, que são muito superiores aos dos catalisadores produzidos pelo homem. Praticamente todas as reações que caracterizam o metabolismo celular são catalisadas por enzimas.
Como catalisadores celulares extremamente poderosos, as enzimas aceleram a velocidade de uma reação, sem, no entanto participar dela comoreagente ou produto. Atuam ainda como reguladoras deste conjunto complexo de reações, portanto são consideradas unidades funcionais do metabolismo celular.
A urease catalisa a hidrólise de uréia em dióxido de carbono e amônia. Em 1926 James Summer mostrou que a urease era uma proteína e tem como objetivo identificar o carbonato de amônio através do vermelho de fenol.
Encontra-se principalmente emsementes, microrganismos e invertebrados. Nas plantas, a urease é um hexâmero – consiste em seis cadeias idênticas – e localiza-se no citoplasma. Em bactérias, é constituída por duas ou três subunidades diferentes. Algumas enzimas requerem um componente não protéico para sua atividade denominado cofator. O cofator enzimático da urease é o íon metálico Ni 2+ portanto, a presença de íons de níquelativa o sítio da urease e é essencial tanto para a atividade funcional como para a integridade estrutural dessa enzima.
Além de ter sido a primeira enzima isolada na forma cristalina. Atualmente a urease é utilizada em procedimentos de diagnósticos clínicos, na determinação de uréia em fluídos biológicos como urina e sangue.

4 - MATERIAIS E MÉTODOS
4.1 – MATERIAIS

- Tubos de ensaio
- Pipetagraduada 
- Pipetador
- Indicador vermelho de fenol
- Conta gotas
- Banho Maria
- Bico de Bunsen
- Béquer
- Tela de amianto
4.2 – REAGENTES

- Urease
- Reativo de biureto
- Ácido nítrico
- Tampão fosfato 1mmol/L ph=7 com 1% de ureia
- Vermelho de fenol
- Cloreto de mercúrio 0,01%


4.3-PROCEDIMENTO

1 – Reação do biureto

Identificou-se dois tubos, sendo A e B. No tubo Acolocou-se 2 gotas de uréase com 2mL de água destilada. Agitou-se e adicionou-se 2mL da solução de biureto e misturou-se. No tubo B colocou-se 2 mL de água destilada e 2 mL do reativo biureto, misturou-se e comparou-se a cor dos dois tubos.

2 – Reação de Heller

Colocou-se 4 gotas da solução de uréase juntamente com 2 mL de água destilada em um tujbo de ensaio, agitou-se. Mantendo o tudoinclinado adicionou-se juntando pela parede 1 mL de ácido nítrico concentrado, sem agitação, afim de formar duas fases.

3 – Teste de atividade da enzima

Identificou-se dois tubos, A e B. No tubo A colocou-se 3 mL de tampão fosfato 1mmol/L pH = 7 com 1% de ureia e 2 gotas de uréase. No tubo B colocou-se 3 mL de tampão fosfato 1mmol/L pH = 7 sem ureia e 2 gotas de uréase. Em ambos os tubosadicionou-se1 gota de solução de vermelho de fenol, agitando-os para que seja observada se há variação de cor durante 5 minutos. Lembrando que a reação processa-se melhor a 37ºC (temperatura ambiente).

4 – Efeito do calor

Em um tubo de ensaio colocou-se 2 mL de água destilada e 2 gotas de uréase. Agitou-se e ferveu-se durante 2 minutos. Em outro tubo colocou-se 3 mLd de tampão fosfato 1mmol/L pH = 7com 1% de ureia com 1 mL da solução de uréase fervida e 1 gota de solução de vermelho de fenol. Misturou-se e aguardou-se 5 minutos para que possa ser observado e comparado com o teste 3.

5 – Efeito de sais de mercúrio

Em um tubo de ensaio colocou-se 2 mL de água destilada e 2 gotas de solução de uréase, agitou-se e juntou-se cuidadosamente com 1 gota de cloreto de mercúrio a 0,01%....
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