Cinética Enzimática

DETERMINAÇÃO DE PARÂMETROS CINÉTICOS DE
REAÇÕES CATALISADAS POR ENZIMAS

Aluno: Danilo Andrade

Cinética de reações enzimáticas

Introdução
Enzimas
Proteínas que catalisam reações químicas com muita eficiência

São muito específicas
Reação não é perturbada por reações secundárias

Produção de somente um produto desejado

Introdução
• James
Summer

Sítios ativos: especificidade estereoquímica. Introdução
E + S enzima substrato

ka ka' [ES]

E + P

complexo enzima-substrato produto

Velocidade depende da concentração de enzima
Equação de Michaelis-Menten

Vmax [ S ] d [ P]
 V0  dt K M  [S ] constante de Michaelis-Menten

Introdução vmax Velocidade da reação (v)

vmax

vmax/2

Vmáx
KM
Concentração do substrato [S]

Método de Lineweaver Burk

1
1
Km
1


x
V0
Vmax
Vmax   S

Saturação da curva

Procedimento Experimental
Banho
de gelo

Extrato de batata, amassado e peneirado

Catecol 5 x 10-2 mol L-1

Cubeta

Catecol
(mL)

Extrato batata (mL)

H2O (mL)

1

0,50

0,1

2,50

2

0,75

0,1

2,25

3

1,00

0,1

2,00

4

1,25

0,1

1,75

5

1,50

0,1

1,50

● Adicionou em todas as cubetas 2 gotas de H2O2

• 2 H2O2 (aq)



2 H2O (l)

O2 (g)

O

OH
OH

enzima
+

catecol

+

O
+

O2
-benzoquinona

2 H2O

Procedimento Experimental

• λ = 458 nm
• Medidas de absorbância a cada 20 s
•Todas as soluções foram deixadas em repouso, para a medida da A∞, como última etapa da experiência. 1,0
0,9

Absorvância

0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
400

420

440

460

480

500
-1

Comprimento de onda (cm )

520

Dados experimentais
Absorbâncias
Temperatura 35°C

Temperatura ambiente (25 °C)
Tempo

Cubeta 1

Cubeta 2

Cubeta 3

Cubeta 4

Cubeta 5

(s)

Tempo

Cubeta 1

Cubeta 2

Cubeta 3

Cubeta 4

Cubeta 5

(s)

0

0,040

0,019

0,15

0,09