Cinetica enzimatica

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Universidade Federal de São Paulo

Campus Diadema

Relatório do Experimento II : Cinética enzimática

Unidade Curricular: Bioquímica I

Docentes: Profª Drª Karin Argenti Simon, Prof Dr Helotonio Carvalho

Grupo:
Realização do experimento: 09/04/2012

Objetivos

Construir curva padrão de absorbância em relação a concentração de solução redutora. Com esses dados, construir a curva de dependência da concentração do substrato na velocidade inicial de reação enzimática. Determinar e estudar parâmetros relevantes como a constante de Michaelis Menten e a velocidade máxima da reação pelo gráfico de Vo versus [S] e pelo diagrama do duplo recíproco.

Introdução

Várias abordagens são comumente usadas para estudar o mecanismo de ação das enzimas purificadas, no entanto, a principal abordagem para estudar o mecanismo de uma reação catalisada por enzima é determinar a velocidade da reação e como ela se altera em resposta a modificações nos parâmetros experimentais. Neste experimento estudaremos a influência da concentração de substrato na velocidade de uma reação enzimática.

A concentração do substrato [S] se altera durante o curso de uma reação à medida que o substrato é convertido em produto. Uma abordagem simplificadora nos experimentos de cinética é medir a velocidade inicial (V0) quando [S] é muito maior que a concentração de enzima [E].

Em 1913 Leonor Michaelis e Maud Menten postularam que a enzima primeiro combina reversivelmente com seu substrato para formar um complexo enzima-substrato em uma etapa reversível relativamente rápida, a segunda etapa é mais lenta corresponde a quebra do complexo enzimas –substrato.

Reação global simplificada:

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Quando [S] é baixa a maior parte da enzima está na forma não combinada a medida que [S] aumenta o equilibrio se desloca para formação de ES, a velocidade é proporcional a [S]. Quando