Cinetica Enzimatica

Introdução:
Cinética Enzimática corresponde a análise quantitativa do efeito de cada um dos fatores que influenciam na expressão da atividade enzimática, avaliando [E], [S], [P], inibidores e ativadores, T, pH e imobilização (heterogênea).
A curva de Michaelis-Menten é a curva que representa a relação entre [S] e Vo tem forma idêntica para maior parte das enzimas. No modelo da cinética de Michaelis-Menten de uma reação mono-substrato existe uma reação bimolecular inicial entre a enzima E e o substrato S para formar o complexo ES. O gráfico de Lineweaver-Burk ou representação de duplo recíproco é a forma mais comum, e simples,de mostrar os dados cinéticos, apesar de não ser a mais fiável. Para tal, tomam-se os valores inversos de ambos os lados da equação de Michaelis-Menten.

Objetivo:
Determinação da curva padrão de glicose para descobrir a equação necessária para o gráfico seguinte e construção da curva de michaelis-menten e cálculo do gráfico de lineweaver-burk

Construção da curva padrão de açucar redutor
Material:

1 Pera
2 Pipetas graduadas de 1ml
1 Pipeta graduada de 5 ml
6 tubos de ensaio
1 Estante
2 béquer
Espectrofotômetro

Soluções:
H20
Glicose (0,2 mg/mL)
Reativo de Somoggy
Reativo de Nelson

Tabela: Construção da curva padrão
Tubos H2O (mL) Glicose 0,2mg/mL (mL) Reativo de Somoggy Agitar bem e levar ao banho maria fervente (100ºC) por 10 min Reativo de Nelson H2O (mL) Glicose (mg) ABS (530 nm)
B 1,0 0 1,0 1,0 7,0 0 0
1 0,8 0,2 1,0 1,0 7,0 0,04 0,136
2 0,6 0,4 1,0 1,0 7,0 0,08 0,204
3 0,4 0,6 1,0 1,0 7,0 0,12 0,296
4 0,2 0,8 1,0 1,0 7,0 0,16 0,395
5 0 1,0 1,0 1,0 7,0 0,2 0,388

Procedimento:
Após termos pipetado as substâncias no tubo de ensaio, como no gráfico acima, determinamos uma curva que serviu para achar a concentração do açúcar redutor produzido a partir da sacarose por ação da invertase. Com os dados obtidos, construímos a curva padrão (absorvância x concentração).

Construção da curva de