Tecnicas de analises

Disponível somente no TrabalhosFeitos
  • Páginas : 10 (2298 palavras )
  • Download(s) : 0
  • Publicado : 5 de novembro de 2012
Ler documento completo
Amostra do texto
RADIOIMUNOENSAIO (RIA)

Este método é quantitativo, a reação antígeno-anticorpo é medida pela detecção de radioatividade, possui alta sensibilidade, os resultados são precisos e rápidos. Sua utilização é para quantificar hormônios, drogas, marcadores tumorais e anticorpos e antígenos em doenças parasitárias, além de serem usadas como teste de triagem do vírus da hepatite B em doadores desangue, proteínas séricas, vitaminas e Ac.
Seu principio geral consiste na quantidade de reagente marcado (antígeno ou anticorpo) que quantifica o antígeno ou anticorpo não marcado na amostra, ou seja, ocorre uma reação de competição por um receptor com uma substância a ser determinada e a mesma substância marcada radioisotopicamente. Os principais radioisótopos utilizados são: Iodo 125 ou131, Cobalto ou Trício, no qual é usado um leitor radiométrico, anticorpos radioativos, antígenos radioativos e a amostra a ser testada.
A técnica de radioimunização pode ser realizada de duas maneiras: a primeira consiste numa quantidade conhecida de antígenos marcados e antígenos da amostras, estes são misturadas e irão reagir competitivamente com uma quantidade fixa de anticorpos fixosna fase sólida. Logo após, a reação imune atinge o equilíbrio, a mistura será lavada para remover os conjugados não reativos que serão separados do complexo imune preso na fase sólida. A concentração do analito é inversamente proporcional ao sinal emitido.
A segunda forma de execução da técnica baseia pelo método do sanduíche, onde um anticorpo ligado a fase sólida forma um imunocomplexo,onde o segundo anticorpo conjugado se liga ao imunocomplexo. Em seguida ocorre uma lavagem para retirar os anticorpos conjugados não reativos, sendo que a concentração do analito neste método ocorre diretamente proporcional ao sinal emitido.
A sua limitação está no alto custo na elaboração do teste, não utiliza reagentes estáveis, ou seja, usa radioisótopos e trítio H3 ou I125 e existia aeliminação de resíduo da reação durante o manuseio. A técnica utiliza um equipamento que conta os raios gama e sua concentração é de 0,0006-0,006.
[pic]

REAÇÃO DE AGLUTINAÇÃO



Este ensaio imunológico não é quantitativo e possui menor sensibilidade que os imunoenzimáticos, pois os complexos antígeno-anticorpo só serão visualizados se apresentarem um tamanho adequado, assim os teste deaglutinação servem para detectar antígenos particulados (bactérias, hemácias e células diversas). E a reação ocorre quando um antígeno particulado associa-se com o anticorpo específico, a execução do teste é rápido e funciona através de duas etapas, sendo a primeira pela associação dos anticorpos com os determinantes antigênicos e a segunda pela ocorrência das colisões entre partículas, ou seja,a dissociação dos anticorpos e associação a partículas vizinhas.
Os determinantes antigênicos podem ser naturais como as hemácias, bactérias (aglutinação direta) ou partículas inertes (látex, poliestireno, bentonita) adsorvidas com antígenos na sua superfície (aglutinação passiva ou indireta).
Aglutinação direta ocorre pela utilização de partículas antigênicas insolúveis em sua formaintegra ou fragmentas, assim hemácias, bactérias, fungos e protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo, desta forma a elaboração do teste consiste na diluição em série do anticorpo em relação à quantidade constante de antígeno. Após o período de incubação a aglutinação se completa e o resultado é expresso como o título do anti-soro, ou seja, a máxima diluição para aglutinar.[pic][pic]

Aglutinação indireta (passiva) acontece quando as hemácias e partículas inertes (látex, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsorção passiva, ou seja, ocorre o contato direto com os antígenos solúveis, por adsorção via agentes químicos, como ácido tânico, cloreto de cromo e por conjugação do antígeno, por meio de ligações químicas covalentes, fornecendo reagentes...
tracking img