Roteiro coliformes

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS - UNICAMP
CENTRO SUPERIOR DE EDUCAÇÃO TECNOLÓGICA – CESET
DIVISÃO TECNOLÓGICA DE SANEAMENTO – DTS
BIOLOGIA APLICADA II - ST 207

Roteiro de aula prática

Coliformes totais e fecais – Determinação pela técnica de Tubos Múltiplos, segundo CETESB – L5.262

1. INTRODUÇÃO

Como o grupo dos coliformes totais inclui gêneros que não são de origem exclusivamente fecal, isto limita sua aplicação como indicador específico de contaminação fecal. O reconhecimento deste fato levou ao desenvolvimento de métodos de enumeração de um subgrupo de coliformes denominados coliformes fecais (coliformes termotolerantes), os quais são diferenciados dos coliformes totais pela sua capacidade de fermentar a lactose em temperatura elevada (44,5°C). A determinação do Número Mais Provável (NMP) de coliformes em uma amostra é efetuada a partir de aplicação da técnica de tubos múltiplos. Esta técnica é baseada no princípio de que as bactérias presentes em uma amostra podem ser separadas por agitação, resultando em uma suspensão de células bacterianas, uniformemente distribuídas na amostra. Consiste na inoculação de volumes decrescentes da amostra em meio de cultura adequado ao crescimento dos microrganismos pesquisados, sendo cada volume inoculado em uma série de tubos. Através de sucessivas diluições da amostra, são obtidos inóculos, cuja semeadura fornece resultados negativos em pelo menos um tubo da séria em que os mesmos foram inoculados e a combinação de resultados positivos e negativos permite a obtenção de uma estimativa da densidade das bactérias pesquisadas, através da aplicação de cálculos de probabilidade. Para análises de águas, tem sido utilizado preferencialmente a fator 10 de diluição, sendo inoculados múltiplos e submúltiplos de 1 mL da amostra, usando séries de 5 tubos para cada volume a ser inoculado.

2. PROCEDIMENTO

Para a realização do teste proceder da seguinte maneira:
a) Identificar a amostra a ser analisada