Relatorio Imunologia

Universidade Federal de Minas Gerais

AULA PRÁTICA – REAÇÃO IMUNOENZIMÁTICA PARA PESQUISA DE ANTICORPOS ANTI T. CRUZI

Belo Horizonte, Setembro de 2014
INTRODUÇÃO

O ELISA indireto é uma técnica utilizada para a procura de anticorpos em uma amostra. Ela utiliza a especificidade antígeno-anticorpo e possuí alta sensibilidade de uma reação enzimática, permitindo assim a detecção de quantidades mínimas de uma substância em particular com uma grande confiabilidade.
Uma enzima, covalentemente ligada a um antígeno ou anticorpo, reage com um substrato, dessa forma levando a oxidação de um cromógeno incolor, o qual desenvolverá coloração dependente da concentração de ligação antígeno-anticorpo pesquisados.
Como vantagens, a técnica apresenta alta sensibilidade, o que ajuda na redução da emissão de testes com falso-negativo, também possuí uma baixa taxa de resultados falsos-positivos. Além disso, ela permite que várias amostras sejam analisadas em um curto espaço de tempo com um baixo custo quando comparada a outras técnicas de imunodiagnóstico.
Porém, ela necessita de mão de obra especializada, alguns dos seus reagentes degradam facilmente com a luz solar e, por ser uma técnica sensível e específica ela é muito susceptível a erros de pipetagem, variações nos tempos de incubação e lavagem e alterações nos reagentes.

OBJETIVOS

Detectar, ou não, a presença de anticorpos do T.Cruzi na soro disponibilizado

METODOLOGIA

- Inicialmente o antígeno (T. Cruzi) é adicionado a placa e se adere a superfície dos poços durante a incubação;
- Em seguida, são realizadas lavagens para a retirada do antígeno livre dos poços;
- Adição do soro do paciente e incubação novamente a 37 graus por 30 minutos. Nessa etapa ocorre a ligação do anticorpo ao antígeno adicionado a placa;
- Nova série de lavagens, cerca de 3 vezes;
- Acrescenta-se