Pesquisa de salmonella

Aula Prática: Pesquisa de Salmonella

Objetivo: Detectar e identificar a presença de Salmonella em alimentos, através de métodos clássicos de identificação, segundo as normas da legislação.

Materiais, Meios e Caldos:
Leite UHT Ágar Lisina Ferro (LIA)
Solução Verde brilhante 0,1% Caldo Triptona 1%
Caldo Selenito Cistina (SC) Caldo Malonato
Caldo Rapapport Vassiliadis (RV) Ágar vermelho de Fenol-1% lactose
Ágar Verde Brilhante (BGA) Ágar vermelho de Fenol-1% glicose
Ágar Salmonella-Shigella (SSA) Ágar vermelho de Fenol-1% sacarose
Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD) Ágar Citrato de Simmons
Ágar Tríplice Açúcar Ferro (TSI) Reagente de Kovacs

Equipamentos e Vidrarias:
Estufa 35 ± 1°C Tubos de ensaio
Estufa 41,5 ± 1°C Alça e agulha de Níquel Cromo
Placas de Petri Estantes para tubos
Pipetas graduadas de 1mL, 2mL e 10mL Pipetadores

Procedimentos:
Pré-enriquecimento:
Pipetar 25mL da amostra a ser analisada e 0,25mL de Solução verde brilhante 0,1% em um frasco com 225 mL de água peptonada, incubar a 35°C por 24hs.

Enriquecimento seletivo:
Agitar levemente a cultura de pré-enriquecimento. Transferir 0,1mL da cultura para um tubo contendo 10mL de caldo Rapapport Vassiliadis (RV) e 1,5mL da cultura para um tubo com 20ml de Caldo Selenito Cistina (SC).
Incubar os tubos a .(35°C/24h)

Isolamento das colônias:
Homogeneizar os tubos de RV e SC, agitando levemente. Semear, por esgotamento, uma alçada de cada uma das culturas de enriquecimento seletivo, em superfície dos seguintes meios seletivos: Ágar Verde Brilhante (BGA), Ágar SS e Ágar XLD. Incubar as placas a 35°C por 24hs.

Análises das colônias:
Ágar Verde brilhante (BGA) - colônias rosadas; alcalinizam o meio e precipitam o corante vermelho de fenol.
Ágar SS - Colônias transparentes com ponto negro. Lactose negativa, com produção de gás sulfídrico (H2S)
Ágar XLD - Colônias rosa escuro, com ou sem centro preto e brilho metálico.

Seleção das