Apostila de biologia molecular

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TÉCNICAS BÁSICAS
DE BIOLOGIA MOLECULAR






Sandra Regina Ceccato Antonini
Silvana Perissatto Meneghin

Alfredo Seiiti Urashima


1

COORDENADORES

• Profª Sandra Regina Ceccato Anto nini – Doutora no Depto.Tecnologia
Agroindustrial e Sócio-economia Rural, CCA/UFSCar, com pós-doutorado em
genética molecular de lev eduras naUniversidade de Sheffield, Inglaterra.

• Profª Silvana Perissatto Meneghin – Assistente no Depto.
Biotecnologia Vegetal, CCA/UFSCar, doutoranda em Microbiologia.

• Prof. Alfredo Seiiti Urashima - Doutor no Depto. Biotecnologia
Vegetal, CCA/UFSCar, com pós-doutorado em fitopatologia e biologia
molecular na Univ ersidade de Kobe, Japão.



Esta apostila se refere ao curso deextensão universitária “Técnicas

básicas de biologia molecular”, oferecido no período de 12 a 16 de julho de

2004, no Laboratório de Microbiologia Agrícola e Molecular (LAMAM), Depto.

Biotecnologia Vegetal / Depto. Tecnologia Agroindustrial e Sócio-Economia

Rural, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de São Carlos.



Endereço: LAMAM - UFSCar
ViaAnhanguera, km 174 – Fone : (19) 3543-2612 / 3543-2614
13600-970 – Araras - SP
e-mail: lamam@cca.ufscar.br






Julho/2004




2



INDICE





1. Introdução………………………………………………………………… 03

2. Segurança no laboratório e disposição de resíduos perigosos…… 03

3. Introdução à biologia molecular e marcadores moleculares……….. 05

4. Extração deDNA genômico total…………………………...………….. 24

5. Quantificação de DNA…………………………………………………... 26

6. Reação PCR……………………………………………………………... 29

7. Polimorfismo por RAPD………………………………………………… 33

8. Polimorfismo por RFLP………………………………………………… 37

9. Análise dos resultados………………………………………………… 45

10. Bibliografia………………………………………………………………. 48

11. Preparo de soluções……………………………………………………49















3

1. INTRODUÇÃO

Há várias técnicas em biologia molecular usadas numa ampla variedade de
estudos tais como genética de populações, estudos sobre evolução ou
filogenia, mapeamento e expressão gênica. Fica difícil cobrir as técnicas exatas
em cada uma das áreas de estudo mas estas técnicas se desenvolveram a
partir de métodosbásicos. O objetivo desse curso é introduzir os alunos às
técnicas básicas como PCR e suas variações, como RAPD, e também RFLP,
discutindo que condições afetam e ssa s técnicas, os cuidados, a forma de
avaliação dos resultados e as aplicações nos mais diversos campos do
conhecimento.


2. SEGURANÇA NO LABORATÓRIO E DISPOSIÇÃO DE RESÍDUOS
PERIGOSOS

Durante o trabalhoexperimental, trabalhar-se-á com reagentes
potencialmente perigosos e equipamentos, sendo necessário adotar
procedimentos de segurança no laboratório.

Segurança no laboratório

1. É proibido comer, beber, fumar, estocar alimentos e usar cosméticos no
laboratório.

2. Devem se r usados sapatos adequados, fechados, e com so la não
deslizante em todas as áreas do laboratório.

3.Cabelos longos devem esta r presos.

4. Jalecos devem ser usados para a proteção contra contaminação ou danos
às roupas. Eles devem ser removidos ao deixar as áreas do laboratório para




4

evitar transferência de contaminantes do laboratório para as áreas
normalmente limpas (como escritórios, copas, etc.)

5. As mãos devem se r lavadas depois da retirada das luvas, antesde deixar o
laboratório, e a qualquer tempo depois do manuseio de materiais tidos
como suspeitos de contaminação.

6. A proteção da face e dos olhos (usando óculos,visores ou outros
equipamentos de proteção) deve ser feita, para evitar o impacto de objetos,
substâncias prejudiciais, luz ultravioleta ou outras radiações.

7. Pipetar qualquer substância com a boca é proibido....
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