Análise por PCR

solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar 500 μL de TE (Tris-EDTA); Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar 800 μL de água milli-Q autoclavada; Centrifugar a solução por 5 min., 25°C e 11000rpm; Descartar sobrenadante; Adicionar solução tampão: 240 μL de água milli-Q autoclavada 80 μL de 5x tampão de Proteinase K (10mM Tris-HCl, pH 7,8, 5mM EDTA e 0,5% SDS) 40 μL de SDS 10% 20 μL de Proteinase K, 20mg/mL Incubar por 30 min. a 58°C (ou deixar overnight a 56°C); Adicionar 120 μL de NaCl 5M; Centrifugar a solução por 10 min., 25°C e 11000rpm; Transferir o sobrenadante (DNA) para outro tudo de 1,5mL; Adicionar 800 μL de etanol absoluto; Centrifugar a solução por 10 min., 4°C e 11000rpm; Descartar o sobrenadante; Adicionar 500 μL de etanol 70%; Centrifugar a solução por 10 min., 4°C e 11000rpm; Descartar o sobrenadante; Deixar o pellet secando e ressuspender em 30 μL de água. (Guardou a -20°C) Comentários: Inicialmente os alunos coletaram a amostra do DNA com swab em mucosa oral e foi colocado em solução, para conseguir liberar as células na solução. Em seguida, foram feitas centrifugações por 5 min à 11000rpm para obter o pellet, com descarte de sobrenadante. Entre cada centrifugação foram feitas reações com soluções para retirar açúcares e outras moléculas que não são de interesse, permanecendo apenas as células contendo o DNA. Adicionou-se água milli-Q autoclavada, para…

O aquecimento de suspensões de amido em excesso de água (maior que 60%) causa uma transição irreversível denominada gelatinizarão. Esta etapa é necessária para intumescer os grânulos de amido e torná-los suscetível, pois geralmente as alfas e beta amilases não agem com eficiência dos grânulos crus que são resistentes às enzimas. O inchamento dos grânulos em água fria e a concomitante solubilização da amilose e amilopectina induzem a gradual perda da integridade granular com a geração de…

Reação do Biureto: • No Tubo 1 (tubo branco): foi colocado: 1 mL do reativo do Biureto + 0,5 mL de água destilada; No Tubo 2: foi colocado: 1 mL do reativo do Biureto + 0,5 mL da solução diluída de proteínas; No Tubo 3: foi colocado: 1 mL do reativo do Biureto + 0,5 mL da solução de aminoácidos; Reação da ninhidrina: • A água foi aquecida à 100oC; No Tubo 4 (tubo branco): foi colocado 2 mL da solução de ninhidrina + 0,5 mL de água destilada; No Tubo 5: foi colocado 2 mL da solução…

extração de ácidos nucléicos, e para a observação dos resultados, em muitos casos, é realizada a técnica de eletroforese que consiste em separar as moléculas de ácido nucléico por diferença de potencial, provocado por um campo elétrico. Estas passam pelas malhas formadas entre os polímeros do gel (agarose ou poliacrilamida) de acordo com as suas propriedades, como peso molecular, carga, conformação das moléculas, bem como fatores como concentração de polímeros no gel, voltagem aplicada,…

minutos. Descartar o sobrenadante. Obs: A centrifugação foi feita com o palito, o professor orientou para que continuássemos o procedimento mesmo assim, para no final analisarmos se este fato induziu mudanças no nosso resultado em relação ao dos colegas. Ressuspender o pellet bacteriano em 3.0 ml de tampão 1 (tris, EDTA). Adicionar 10µl de suspensão lysozima 10mg/ml, agitar suavemente e incubar em gelo por 30 minutos. Obs: A lysozima atua na degradação da estrutura celular,…

1,5 mL da amostra de bactérias por auxílio de micropipeta (Gilson) de 1000µL para um tubo eppendorf de 1,5mL, e colocado em centrífuga (marca: BECKAMN; modelo Avanti 30 centrifuge ) a 14.000 rpm por 3 minutos. Após a centrifugação foi descartado o sobrenadante, e a amostra foi seca com uma pipeta automática de 200µL (Gilson). Ao término deste processo foi retirado mais 1,5 mL de amostra bacteriana com auxílio da pipeta de 1000µL, levando a amostra a centrifugação a 14.000 rpm por 3…

principais propriedades de hidratação são o índice de absorção de água (IAA), o índice de solubilidade em água (ISA) e o volume de intumescimento. O Índice de Absorção em Água (IAA) indica a quantidade de água absorvida pelos grânulos de amidos de uma determinada amostra submetida a um tratamento térmico, sendo que uma alta capacidade de absorção de água em farinhas é desejável para o preparo de sopas, mingaus e pudins instantâneos (TORRES, 2005). Por outro lado, o índice de absorção de…

CLONAGEM E EXPRESSÃO DA PROTEÍNA LigA DE Leptospira interrogans NA LEVEDURA Pichia pastoris Trabalho apresentado a disciplina de Biologia Molecular . Ouro Branco, 20 de abril, 2013 1. Introdução 1.1 Leptospirose Leptospirose é uma infecção aguda ou crônica causada por uma bactéria do gênero Leptospira, que é transmitida por animais de diferentes espécies como roedores, suínos, caninos, e bovinos para os seres humanos. O contágio se…

Series IRL Press – 1995. - PCR Protocols J. M. S. Bartlett D. Stirling Human Press – 2ª. Ed.- 2003 5 6 Soluções Básicas Utilizadas no Laboratório de Biologia Molecular: Tris.HCl [tris(hydroxymethyl)aminomethane] - 1M Dissolva 121g de Tris Base em 800 ml de água MiliQ Ajuste o ph desejado com HCl concentrado Adicione água até 1L Autoclave Cerca de 70 ml de HCl são necessários para pH de 7,4 ; e cerca de 42 ml para pH de 8,0. Nota importante: O pH dos tampões com Tris muda…

de exames seja realizado, primeiramente é preciso extrair o DNA através do método “salting out” e posteriormente submeter esse DNA a uma eletroforese a qual detalhará o tamanho de suas bases possibilitando sua análise. A Eletroforese é um método que depende da capacidade de moléculas carregadas migrarem quando submetidas a um campo elétrico, a separação eletroforética é geralmente realizada usando eletroforese em gel poliacrilamida ( PAGE “polyacrylamide gel electrophoresis” ) (Karp…