tecnicas de PCR

Universidade Vale do Paraíba-UNIVAP
Faculdade de Ciências da Saúde

Relatório de Aula Prática:
Amplificação de DNA por PCR

Professora Renata Canevari
Patricia Cavali de Macedo-01010520
João Rafael Silvério-01012344
Daniele-
Priscila-
Fernanda-
Colocar os nomes:??

São José dos Campos, São Paulo.
2014

Introdução:

Sabendo a sequência de interesse de partes do gene, podemos amplifica-la em um tubo de ensaio, através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Desenvolvida por Kary Mullis em 1983 revolucionou a biologia molecular. Um método in vitro rápido, sensível e versátil para amplificação seletiva de sequências definidas de DNA (ou RNA) a partir de amostras complexas de ácidos nucleicos. Gera quantidade de DNA suficiente para manipulação e análises subsequentes.
Requer a ligação de pequenas sequências de DNA (oligonucleotídeos, primers) a sequências complementares que flanqueiam a região alvo a ser amplificada. E a ação da enzima DNA polímerase e para sintetizar novas cópias idênticas a região alvo a ser amplificada.
No DNA bifilamentar contendo a sequencia alvo é adicionado dois primers escolhidos ou criados com sequencias complementares aos sítios de ligação de primer nas pontas 3´ do gene alvo nos dois filamentos. Os filamentos são separados por aquecimento. Os primers flanqueiam a sequência alvo e a Taq polimerase sintetiza o primeiro conjunto de filamentos complementares da reação. Os dois dúplices são novamente aquecidos, expondo quatro sítios de ligação então os dois primers se ligam de novo aos seus respectivos fragmentos nas pontas 3´ da região alvo. A taq polimerase sintetiza quatro filamentos complementares. O processo pode ser repetido indefinidamente criando cada vez mais moléculas de duplo filamento de DNA com a sequência alvo. (DE D.L. Nelson and M.M. Cox, Lehninger. Principles of Biochemistry,4th ed 2005).

Objetivo: Amplificar DNA genômico a partir da amostra de DNA de Candida krusei, extraída em