Protéinas

Universidade Federal Fluminense
Bioquímica IV - Farmácia
Alunas: Anne Schuler
Professora: Rafaela Muniz

Estudo físico-químico das proteínas

Outubro/2013
Metodologia:
Primeiramente foram enumerados 12 tubos de ensaio. São eles: 1 - Reação do Biureto:
Tubo 1: Colocou-se 1mL do reativo do Biureto + 0,5 mL de água destilada.
Tubo 2: Colocou-se 1mL do reativo do Biureto + 0,5 mL da solução diluída de proteínas.
Tubo 3: Colocou-se 1mL do reativo do Biureto + 0,5 mL da solução diluída de aminoácidos.

2- Reação da ninhidrina:
Tubo 4: Colocou-se 2 mL da solução de ninhidrina + 0,5 mL de água destilada.
Tubo 5: Colocou-se 2 mL da solução de ninhidrina + 0,5 mL da solução diluída de proteínas.
Tubo 6: Colocou-se 2 mL da solução de ninhidrina + 0,5 mL da solução diluída de aminoácidos.
Tubo 7: Colocou-se uma solução contendo prolina.
Ferveu-se esses tubos por aproximadamente cinco minutos.

3- Precipitação ácida:
Tubo 8: Colocou-se 1 mL de TCA + 1 mL da solução diluída de proteínas. Agitou-se e em seguida centrifugou-se por 10 minutos, separando as frações: sobrenadante e precipitado.
Tubo 9: Colocou-se 0,5 mL do sobrenadante e adicionou-se 1 mL de reativo do biureto.
Feito isso, adicionou-se a solução tampão ao tubo 8, agitando-a.

4- Efeito da adição de sais:
Tubo 10: Colocou-se 2 mL de solução diluída de proteínas + 2 mL de solução saturada de sulfato de amônio. Agitou-se e centrifugou por 10 minutos. Em seguida, separaram-se as frações: sobrenadante e precipitado.
Tubo 11: Colocou-se o sobrenadante e adicionou-se igual volume de TCA. Em seguida, centrifugou-se novamente.
Feito isso, adicionou-se solução tampão ao tubo 10.
5- Efeito da adição de solventes orgânicos:
Tubo 12: Colocou-se 1 mL da solução de proteínas e adicionou-se lentamente 2 mL de etanol gelado.

6- Cromatografia por peneira molecular:
Na prática, foi usada uma solução de azul de Destran e vitamina B12. Esperou-se que as