Estudos cinéticos da fosfatase alcalina

Escola de Ciências e Tecnologia
Departamento de Química

Licenciatura em Bioquímica
Enzimologia
2013/2014

Estudo Cinético da Fosfatase Alcalina

Docentes:
Isabel Ferreira
Rui Ferreira
Discentes:
Anaïs Silva, 31202
Joana Silva, 31298
João Letras, 30247
Vítor Almodôvar, 30292

Índice
Objectivos 3
Introdução 4
Procedimento Experimental 10
Resultados e Tratamento de Resultados 12
Discussão e Conclusão 17
Bibliografia 18
Anexos 19

Objectivo Geral
Extracção e caracterização cinética da fosfatase alcalina da mucosa intestinal de rato.

Objectivos Específicos
Conhecer:
Estrutura enzimática da fosfatase alcalina;
O mecanismo de cinética enzimática – curva de Michaelis-Menten;
O significado de velocidade inicial (v0) da reacção e de actividade enzimática.
Compreender:
Estrutura enzimática da fosfatase alcalina;
O efeito da temperatura e do pH assim como da concentração de enzima, de substrato e de fosfato inorgânico na actividade enzimática;
O funcionamento do aparelho de espectrometria de absorção molecular.
Avaliar:
A actividade cinética do enzima.
Executar:
Construir o gráfico de Michaelis-Menten;
Linearização de Linewaver-Burk;
Linearização de Eadie e Hofstee;
Linearização de Hanes;
Método Linear Directo de Eisenthal e Cornish-Bowden.
Comparar:
Os parâmetros cinéticos obtidos na ausência e na presença do fosfato inorgânicos.
Determinar:
O tipo de inibição;
Os parâmetros cinéticos para a reacção com a presença do inibidor;
Os valores de v0 através das curvas de reação.
Dar valor:
Cuidados de segurança;
Conhecimentos adquiridos anteriormente.

Introdução

1. Enzimas
O estudo das propriedades dos enzimas e mecanismos de catálise enzimática são os aspectos mais relevantes da enzimologia e que a tornam fundamental para muitas áreas de investigação da bioquímica.
Os enzimas são com funções