Aula 2 M TODO DE ESTUDO DA C LULA ENF

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
CENTRO DE BIOCIÊNCIAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E GENÉTICA

MÉTODOS DE ESTUDOS DA
CÉLULA

Prof. Delando Nasário de Medeiros

1. INTRODUÇÃO








1. Aperfeiçoamento dos métodos de investigação.
2. Microscópio óptico de luz  célula.
3. Microscópio eletrônico  organelas e moléculas celulares 3. Equipamentos como ferramentas de estudos.
4. Biologia Celular e Molecular  depende de aperfeiçoamento de instrumentos e técnicas de pesquisa. TAMANHO DAS CÉLULAS

•

Hemácia humana - 7.6 µm
Óvulo Humano - ~100 µm

2. OBJETIVOS:
Compreender os métodos gerais empregados para decifrar as estruturas e as funções celulares.
Identificar a importância das técnicas e suas metodologias experimentais no estudo das células.

3. MÉTODOS:
3.1.PREPARADOS PERMANENTES:
 Fixação do material (1ª etapa)
Finalidades:
 Evitar autólise
 Impedir invasão de microrganismos decompositores.
 Endurecimento do tecido (célula) para os cortes.
 Aumentar afinidade por corantes (MO) e contrastantes em (ME).

3.2. FIXADORES:
a) Formaldeído  H-C-OH
Não Forma ligação cruzada
Preserva a integridade bioquímica e antigênica da célula
b) Glutaraldeído  HOC-CH2-CH2-CH2-COH
Forma ligação cruzada com o grupo amina livre das proteínas Fixa bem proteínas
Fixador aditivo
Concentração 2,5%

3.2. FIXADORES:

3.2. FIXADORES:
c) Tetróxido de ósmio: OsO4
Usado na segunda fixação
Fixa bem lipídios (ácidos graxos insaturados)
Confere contraste as membranas
Poder de penetração 1mm/hora
Não fixa bem proteínas devido ao deslocamento do ponto isoelétrico
d) Misturas Fixadoras  contêm proporções variadas. 3.3. Microtomia: corte do material
1. Microscopia óptica  inclusão parafina
2. Microscopia eletrônica  inclusão resinas

Micrótomo

Cortes em parafina

3.3. Microtomia: corte do material

3.4. Coloração/Contrastação:
Corantes:
1. ácidos: eosina, orange G e fucsina..
2. básicos: azul de toluidina, azul de metileno hematoxilina. 3. vitais: vermelho neutro