Roteiro de aula prática de Bioquímica

Dosagem de Creatina Fosfotransferase (CKP)

1. Descreva o princípio da técnica e o método utilizado nas dosagens de Creatina fosfotransferase.

Em meio alcalino a creatina fosfotransferase (CPK) catalisa a seguinte reação:

Em meio ácido, a fosfocreatina neo-formada é hidrolisada liberando-se creatina e íon fosfato. O fosfato inorgânico liberado é proporcional à atividade enzimática.

Foi utilizado nas dosagens o sistema colorimétrico para determinação de creatina fosfotransferase no soro.Somente para uso diagnóstico in vitro.

2. Faça um resumo dos procedimentos técnicos utilizados.
Preparo do substrato de uso:

A um frasco de ATP-Glutation, adicionar 1,2mL do Substrato e agitar até dissolver. Contém material suficiente para dosagem.
Rotular 4 tubos de ensaio com B (branco), BT (branco teste), T (teste), P (padrão).

Proceder como segue:

Adicionar no teste 50 μL de soro.
Incubar durante 20 minutos em banho Maria (37oC). Retirar do banho maria e proceder como segue:

Deixar repousar por 10 minutos à temperatura ambiente. O tempo de 10 minutos, após a adição de reagente molibdato e Ácido Ascórbico, deve ser observado com atenção, pois nesse período se dá a hidrólise da fosfocreatina neo-formada. Após o repouso proceder como segue:

Homogeneizar por agitação (as proteínas se dissolvem). Deixar em repouso de 1 a 2 minutos. Ler as absorvâncias dos tubos T (teste), BT (branco teste) e P (padrão), em espectrofotômetro ou fotocolorímetro em 660nm ou filtro vermelho, acertando o zero com o branco (B).

3. Por que a técnica utiliza o branco do teste?
O branco do teste é utilizado para descontar a absorbância dos demais reagentes juntamente a amostra, para que seja levada em conta apenas a reação correta para a análise.

4. Explique porque a técnica coloca uma incubação inicial (3 minutos).
Este período de incubação é necessário para que a CK-MB na amostra fixe-se com a fosfatase alcalina, sendo arrastada para a