Neubauer

BMM 5777 – Culturas celulares e suas aplicações em Microbiologia

P3a - Contagem de células em câmara de Neubauer
1. Colocar a lamínula sobre a área de marcada na câmara de contagem. Usar lamínulas especiais que fornecem a profundidade correta da câmara de contagem. Não usar lamínulas comuns.
2. Homogeneizar bem a suspensão celular e transferir com esterilidade 0,1 ml para um pequeno tubo de ensaio.
3. Adicionar 0,3 ml de corante azul de tripano 0,2% ao tubo, obtendo assim uma diluição
1/4.
4. Misturar os conteúdos e retirar uma alíquota de 0,5 ml com a pipeta.
5. Encostando a ponta da pipeta na borda da lamínula, preencher cuidadosamente a câmara de contagem. O líquido deve preencher apenas um lado da câmara e não deve chegar aos canais de cada lado da área de contagem (Fig. 1).
6. Deixar as células sedimentarem por 2 min.
7. Focalizar a área demarcada da câmara de contagem com a objetiva de menor aumento (Fig.2). Nas áreas 1, 2, 3 e 4, o volume com a lamínula colocada corresponde a 0,1 mm3.
8. Contar as células nas 4 áreas de um lado da câmara de contagem, seguindo o esquema da Fig. 2 e dividir o valor por 4 para obter a média.
9. Como a suspensão foi inicialmente diluída a 1/4, o número de células contadas será igual à média multiplicada pelo fator de diluição, no caso 4.
10. Para obter o número de células/ml, multiplicar corrigir o valor obtido por 10.000, pois:
1 ml = 1 cc
1 cc = 10 x 10 x 10 mm = 1.000 mm3
.Na câmara de Neubauer obtemos o número de celular por 0,1 mm3, então devemos multiplicar por 10, portanto 10 x 1.000 = 10.000
11. Assim temos: no total de células no de células/ml =

x fator de diluição x 10.000 o n de quadrantes contados

Critérios para a contagem (Fig. 3):
•

enumerar células com núcleo bem visível;

•

contar células isoladas como 1 célula (a);

•

contar grumos constituídos por células facilmente distinguíveis por seus núcleos e citoplasmas como grupos de células isoladas e contar cada