Microbiologia

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17/01/2013

PRESERVAÇÃO DE CULTURAS MICROBIANAS
Prática 22: Turmas 3A e 3B Pág. 117

OBJETIVOS
Discutir os vários métodos de conservação dos micro-organismos.  Mostrar alguns procedimentos de preservação para fungos e bactérias.


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INTRODUÇÃO


A manutenção e preservação de culturas puras no laboratório apresentam grande importância. Manter a bacterioteca requertécnicas especializadas com objetivo de preservar as bactérias viáveis e com suas características típicas por meses (manutenção) ou anos (preservação).



INTRODUÇÃO



As vantagens de manter culturas-estoques foram resumidas por Morton e Pulaski (1938):
Redução da contaminação por fungos, sendo a conservação o único modo de conduzir um trabalho preciso do ponto de vista bacteriológico. Nenhum tratamento prévio da cultura se faz necessário.  Todos os micro-organismos testados sob óleo sobreviveram mais tempo que o controle.  Sem alterações do ponto de vista bioquímico e cultural.


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vantagens de manter culturas-estoques



As culturas estão disponíveis para repique sem interferir nas culturas-estoques.



Método pode ser aplicado paracolônias ou biomassa de culturas.



Nenhum selamento com rolhas de borracha é necessário.



Nenhum equipamento especial é requerido.

INTRODUÇÃO



As primeiras tentativas de coleções de culturas remontam o início do século XX, por um professor tcheco (Frantisesk Kral). Em 1915, sua coleção foi transferida para a Universidade de Viena e perdeu-se toda na Segunda Guerra Mundial.
Exceto o que havia sido levado para Chicago.



Em 1970, foi formada a World Federation of Culture Collections com informações de 329 coleções de 52 países.

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IMPORTÂNCIA DE UMA COLEÇÃO DE
CULTURAS

Pesquisa  Indústria / Biotecnologia  Valor didático
 

No caso de um laboratório acadêmico, a tendência é comprar espécies “padronizadas”, utilizá-las para finsdidáticos, e eventualmente manter uma pequena bacterioteca e uma micoteca.

IMPORTÂNCIA DE UMA COLEÇÃO DE
CULTURAS


preservação a longo prazo
 

evita problemas com o novo isolamento de microrganismos economia de tempo, mão de obra e custos com material de consumo



importante função da coleção de culturas


garantia de sobrevivência, estabilidade e pureza

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17/01/2013PROBLEMAS COM O CULTIVO
Contaminação  Perda de viabilidade  Mutação  Resíduos metabólicos


SOLUÇÃO: METODOLOGIA DE
PRESERVAÇÃO Diminuir o crescimento e metabólicas  Meio mínimo  Preservação em longo prazo:
 

as

atividades

Evita problemas com novo isolamento;  Economia de tempo, mão de obra e custos.

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ESCOLHA DO MÉTODO DE PRESERVAÇÃO


Pontos a seremconsiderados:

Manutenção da viabilidade;  Manutenção das propriedades originais;  Pureza;  Custos de preservação e manutenção;  Tamanho estimado do acervo;  Importância do acervo;  Necessidade de acesso e uso da cultura;  Disponibilidade de equipamentos e de recursos humanos e financeiros.


MÉTODOS DE PRESERVAÇÃO
 

Curto prazo:
      

Repique contínuo Preservaçãosob óleo mineral Preservação em água (método de Castellani) Congelamento a -20°C Secagem em solo Secagem em papel de filtro Secagem em sílica

Médio prazo:



Longo prazo:
Liofilização  Congelamento a -80°C  Criopreservação em nitrogênio líquido


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REPIQUE CONTÍNUO
 

Princípio: Diminuição do metabolismo. Fatores a serem considerados:
     

Meioadequado. Temperatura de estocagem. Frequência entre as transferências. Minimizar o n° de repiques. Examinar a pureza em cada transferência. Conservar em duplicata.

REPIQUE CONTÍNUO

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Repique contínuo



Vantagens
Baixo custo;  Não requer equipamentos especializados;  O manuseio é simples.




Desvantagens
    

Riscos de contaminação e possível perda...
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