Gram

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Coloração de Gram


1 Introdução

A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram. Ela é um dos processos de coloração mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas (que coram em roxo) e gram-negativas (coram em rosa).

No procedimento da coloração de Gram, um esfregaço de cocos e bacilos fixado com calor éprimeiramente coberto com um corante púrpura básico (coloração primária) como a violeta de genciana, e então o corante é lavado. O esfregaço é coberto de com iodo (um mordente) e lavado. Neste momento, ambas, as bactérias gram-positivas e gram-negativas, adquirem cor púrpura. A lâmina é lavada com etanol ou uma solução de álcool-acetona (um descolorante) e então lavada com água. Agora, as célulasgram-positivas estão púrpura e as gram-negativas estão incolores. Na etapa final, a safranina (ou fuccina) é adicionada como contracorante, e a lâmina é lavada, seca e examinada microscopicamente. As bactérias gram-positivas retêm o corante púrpura, mesmo após a lavagem com álcool. As bactérias gram-negativas aparecem de cor rosada, pois adquirem o contracorante safranina (ou fuccina).

OStaphylococcus aureus (púrpura) é uma bactéria gram-positiva. A Escherichia coli é uma bactéria gram-negativa.


2 Coloração de Gram

A coloração de Gram é um dos processos de coloração mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas.

Neste procedimento, um esfregaço fixado pelo calor é recoberto com um corante básico púrpura, usualmente avioleta de genciana. Uma vez que a coloração púrpura impregna todas as células, é denomina coloração primária. Após um curto período, o corante púrpura é lavado e o esfregaço é recoberto com iodo. Quando o iodo é lavado, ambas as bactérias gram-positivas e gram-negativas aparecem em cor violeta escuro ou púrpura. A seguir, a lâmina é lavada com álcool ou uma solução de álcool-acetona. Esta solução é umagente descolorante, que remove o púrpura das células de algumas espécies, mas não de outras. O álcool é lavado e a lâmina é então corada com safranina (ou fuccina), um corante básico vermelho. O esfregaço é lavado novamente, seco com papel e examinado microscopicamente.

O corante púrpura e o iodo se combinam com cada bactéria e a coram de violeta escuro ou púrpura. As bactérias que retêm estacor após o álcool são classificadas como gram-positivas; as bactérias que perdem a cor violeta escuro ou púrpura após a descoloração são classificadas como gram-negativas. Como as bactérias gram-negativas são incolores após a lavagem com álcool, não são mais visíveis. É por isso que o corante básico safranina (ou fuccina) é aplicado; ele cora as bactérias gram-negativas de rosa. Os corantes como asafranina, que possuem uma cor contrastante com a coloração primária, são denominados contracorantes. Como as bactérias gram-positivas retêm a cor púrpura original, não são afetadas pelo contracorante safranina.

Os diferentes tipos de bactérias reagem de modo diferente à coloração de Gram, provavelmente porque diferenças estruturais em suas paredes celulares afetam a retenção ou liberação deuma combinação de violeta de genciana e iodo, denominada complexo violeta-iodo (CV-I). Entre outras diferenças, as bactérias gram-positivas têm uma parede celular mais espessa de peptideoglicano que as bactérias gram-negativas. Além disso, as bactérias gram-negativas contêm uma camada de lipopolissacarídeo como parte de sua parede celular. Quando aplicada a células gram-positivas e gram-negativas,a violeta de genciana e o iodo penetram facilmente nas células. Dentro das mesmas, a violeta de genciana e o iodo se combinam para formar o CV-I. Este complexo é maior que a molécula de violeta de genciana que penetrou na célula e, devido a seu tamanho, não pode ser removido da camada intacta de peptideoglicano das células gram-positivas pelo álcool. Conseqüentemente, as células gram-positivas...
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