Enzimas

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ENZIMAS
1) O que são e como agem as enzimas?
Enzimas são proteínas que apresentam atividade catalítica. A complexa estrutura molecular enzimática é majoritariamente constituída por uma parte proteica, porém a ela podem estar integradas outras moléculas, como carboidratos e lipídeos. As proteínas são heteropolímeros formados por aminoácidos ligados covalentemente por ligações peptídicas.2) Qual unidade de medida é usada para expressar a atividade enzimática? O que significa esse parâmetro?
A atividade enzimática é expressa em unidades de atividade. A definição proposta pela IUB (unidade internacional – IU) considera uma unidade de atividade como a quantidade de enzima que catalisa a transformação de um micromol de substrato por minuto em condições de ensaio definidas. Emmuitas situações, emprega-se a atividade específica, que é expressa em unidades (IU) por massa de proteína.

3) Quais fatores levam a diminuição da atividade enzimática?
A expressão da atividade de uma enzima é medida através de sua velocidade de reação, determinada em condições experimentais estabelecidas. A concentração de produto formado aumenta linearmente com o tempo num dado intervalo(velocidade de reação constante). No entanto, a partir de certo tempo, a velocidade (valor da tangente à curva num dado instante) decresce. Vários fatores podem contribuir para esse decréscimo: diminuição da concentração de substrato, inativação parcial da enzima no decorrer da reação, inibição por produto e deslocamento do equilíbrio se a reação for reversível.

4) Quais métodos instrumentaispodem ser utilizados para determinar a atividade enzimática?
Podem ser usados métodos variados para avaliar a variação das concentrações das espécies. Alguns deles são muito diretos (espectrofotometria, fluorimetria, titulometria) e outros menos (medida da variação da viscosidade). Uma certa variedade de condições de ensaio, bem como de métodos de determinação, é observada para uma mesma enzima,dependendo do produtor, do investigador ou do usuário. Assim, é sempre difícil comparar resultados de atividade enzimática obtidos por diversos autores, em funçao da falta de definição de padrões consensualmente aceitos.

5) Cite uma fonte animal, vegetal e microbiana utilizada para extração e purificação de enzimas de interesse biotecnológico em geral.
Animal: Pepsina→ esta preparação é obtidoa partir da mucosa do estômago do porco. A mucosa do estômago é fatiada e misturada com duas ou três vezes se volume de ácido clorídrico diluído ou ácido fosfórico a pH 2,0, e mantida por 16 horas à temperatura ambiente. Em seguida, eleva-se à temperatura a 40-45°C por uma hora. Um procedimento alternativo seria manter por dois dias a38°C. esse tratamento ácido modifica o pepsinogênio empepsina. O tecido não digerido é então filtrado e o filtrado seco em secador a vácuo a 40°C. A preparação da pepsina de alta potencia e pureza é obtido através da concentração à vácuo do filtrado, resfriamento a5-8°C e adição de etanol para atingir a concentração de 60%. A mucina que precipita é removida. A pepsina é precipitada pela adição de mais etanol, sendo recuperada através de filtração e secagema baixa temperatura.
Vegetal: Papaína→ a enzima proteolítica papaína é um constituinte do látex do fruto verde de mamão (Carica papaya). O látex bruto seco em pó é comumente descrito como papaína. O látex fresco apresenta uma alta atividade proteolítica, sendo que mais da metade da proteína total contida no látex é inicialmente ativa, porém facilmente inativada pela oxidação. O ar, provavelmentecatalisado por outros constituintes do preparo enzimático bruto, causa uma rápida deterioração da enzima. A inativação pode ser inicialmente revertida pela adição de agentes redutores como: sulfeto de hidrogênio, cianeto de hidrogênio, sulfetos e sulfitos, porém se a oxidação for prolongada, as proteínas não poderão ser mais reativadas. Por essa razão, as papaínas comerciais não são armazenadas...
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