electroforese

BIOQUÍMICA

AULA PRÁTICA:Eletroforese OBJETIVO: Realizar eletroforese com soro sanguíneo humano (proteína Albumina)

INTRODUÇÃO TEÓRICA

Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa. Em alguns casos, o formato da moléculas também influi, pois algumas terão maior facilidade para migrar pelo gel.A eletroforese normalmente é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA. Foi introduzida cientificamente em 1939 por A.Tiselius e A.E. Kabat com o objetivo de separar partículas orgânicas.
A utilização de eletroforese no uso da rotina laboratorial tem sido importante para determinar hemoglobinopatias e talassemias, auxílio diagnóstico para doenças específicas, por ex.: mieloma múltiplo, além de aplicação em lipidogramas, biologia molecular e enzimopatias.
Técnicas mais sensíveis, como é o caso da focalização isoelétrica permitem a separação de frações com excelente resolução

Eletroforese em gel de agarose
Nesse caso, a agarose é utilizada como gel para a eletroforese. A agarose é um polissacarídeo, e forma uma rede que segura as moléculas durante a migração. Dependendo da concentração de agarose, têm-se uma diferença no gradiente de separação. Para preparar um gel de agarose, simplesmente faz-se a mistura entre o pó de agarose e solução tampão (TBE). Após fundir, coloca-se brometo de etidio, que fará o DNA ou RNA "brilhar" quando exposto ao UV. Quando a mistura esfriar o gel estará duro. Esse endurecimento é feito em um local apropriado, o mesmo local onde será feita a corrida da amostra. Um detalhe importante é a colocação do pente no gel durante o endurecimento. O pente cria poços que serão utilizados para a colocação das amostras.
A eletroforese em gel é um dos métodos mais utilizados