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Objectivo: 1
Introdução: 1
Esquema de montagem: 2
Material: 3
Procedimento: 3
Observações: 4
Resultados: 4
Discussão dos resultados e Conclusão: 4
Bibliografia: 4
Assinatura: 4


Objectivo:
Separar as proteínas, provenientes de vários soros, de acordo com a sua mobilidade electroforética.
Verificar as diferentes mobilidades electroforéticas das proteínas presentes no soro.Introdução:
O movimento de partículas electricamente carregadas sobre a influência de um campo eléctrico recebe a denominação de electroforese: os iões negativos caminham em direcção ao pólo positivo e os iões positivos em direcção ao pólo negativo. Electroforese é uma técnica de análise qualitativa e quantitativa para substâncias que apresentem cargas eléctricas, permitindo distinguirmoléculas que apresentam diferenças mínimas nas suas composições.
As proteínas, admitem uma carga eléctrica devido ao seu carácter anfotérico: isto é, possuem características ácidas ou básicas, dependendo do pH do meio, já que basicamente são formadas por aminoácidos. Existe um pH, para o qual, a proteína se comportará como neutra, este pH é denominado ponto isoeléctrico, e nele a sua mobilidadeelectroforética será evidentemente nula. O pH do meio, portanto, terá influência decisiva no processo de migração electroforética, isto é, acima de um dado valor de pH - típico para cada proteína - as partículas estarão carregadas negativamente e abaixo deste valor serão partículas positivas. Além do pH da solução tampão, outros factores influenciam a separação de substâncias na técnica electroforética,como por exemplo o potencial eléctrico aplicado, a força iónica e a viscosidade da solução tampão utilizada bem como a natureza, peso molecular e a carga total da partícula. Cada um destes factores tem uma série de características que podem interferir com as dos outros factores.
A electroforese de proteínas foi introduzida pela primeira vez em 1937 por Tisselius, o qual idealizou um métododenominado electroforese livre (frente móvel), em que se utilizava um meio líquido. Nas últimas décadas essas técnicas têm sofrido aperfeiçoamentos constantes, possibilitando análises mais precisas. O método mais utilizado hoje em dia denomina-se electroforese de zona, o qual se caracteriza pelo facto de que a electroforese ocorrer sobre um suporte sólido, como papel de filtro, acetato de celulose,camadas de agar ou agarose. A utilização do acetato de celulose tem a vantagem de permitir uma velocidade electroforética mais elevada, o uso de um suporte teoricamente inerte, o uso de técnicas de coloração e de diafanização e o uso de pequenas quantidades de amostra.
Na actualidade, o soro pode ser separado em várias fracções: albumina, 1, 2, 1,  e  globulinas. A banda da albumina érelativamente homogénea, porém nas restantes bandas existem vários tipos de proteínas por banda.
Para realizar a electroforese deve escolher-se um pH em que a maioria das proteínas tenham a mesma carga “net” (balanço de todas as cargas), mas apresentem mobilidades diferentes. Para esse efeito recorre-se ao uso de uma solução tampão de pH 8,6. Quimicamente as proteínas com carga “net” numa solução com umdeterminado valor de pH, deslocam-se para o ânodo, sendo que as diferentes proteínas movem-se a diferentes velocidades, consoante a sua carga, tamanho e forma das moléculas. A electroforese é feita até que as proteínas estejam nitidamente separadas. A localização das mesmas depende para além das variáveis atrás descritas, da força electroosmótica.
Esta força pode ser visualizada como umacorrente de tampão passando através do meio de suporte no sentido contrário ao do campo eléctrico. A força electroosmótica é originada pela interacção entre os iões da solução tampão (carregados positivamente) que migram para o pólo negativo e os do suporte (carregados negativamente) que migram para o pólo positivo. Assim sendo, o deslocamento destas proteínas resulta do balanço da força proveniente...
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