Técnica do Biureto

Introdução:

O Biureto é uma substância formada por hidróxido de potássio, sulfato de cobre e tartarato de sódio e potássio usada em dosagem e identificação de proteínas com a finalidade de corrigir atividades enzimáticas, descobrir patologias, etc.

Objetivo:

Identificar e dosar a albumina em amostras de leite e soro, construir um gráfico da absorbância e calcular a concentração das amostras de biureto nos diferentes tubos.

Materiais e métodos:

Foram necessários 7 tubos de ensaio, pipetas volumétricas, cronômetro, espectrofotômetro, béqueres, solução de hidróxido de sódio, solução de sulfato de cobre, amostra de albumina, soro diluído 30 vezes e leite diluído 300 vezes. Em primeiro momento foi feito um teste qualitativo em tubo de ensaio apenas para identificar a presença da proteína albumina, para isso foram adicionados 2 mL da albumina, 1 mL de NaOH e 0,5 mL de CuSO4 1% e após 10 minutos apareceu um cor violeta confirmando a presença de albumina. Em 4 tubos foram adicionados a amostra de albumina em volumes diferentes junto com um volume fixo de biureto, e um apenas com biureto (cor azul clara) usado como referência visual, conforme tabela abaixo:

Branco
1
2
3
4
Albumina
-
0,5 mL
1,0 mL
1,5 mL
2,0 mL
Biureto
5 mL
5 mL
5 mL
5 mL
5 mL

Após a adição de albumina e biureto em cada tubo e a espera de 10 minutos, pode-se observar que cada tubo mostra uma coloração azul claro até violeta conforme varia a concentração. Depois no espectrofotômetro foram medidas a absorbância de cada tubo em 540 nm.

Absorbância do tubo 1: 0,176
Absorbância do tubo 2: 0,307
Absorbância do tubo 3: 0,477
Absorbância do tubo 4: 0,545

Nos tubos de ensaio restantes foram colocados 1 mL de soro e 5 mL de biureto em um, e 1 mL de leite e 5 mL de biureto no outro também e após 10 minutos foram medidas a absorbância dos dois tubos também.
Absorbância do leite: 0,014
Absorbância do soro: 0,072

Para se determinar a concentração do leite e do soro