Tecnica Enzimologia

Cinética Microbiana

Hidrólise

Glicose

Piruvato

Produtos de Fermentação
( lactato, álcoois, ácidos, etc.)

6 ATP

8 ATP

30 ATP

Ciclo de Krebs

Respiração Anaeróbia
(CO2, SO42-, NO3-)

CO2

O2
Respiração Aeróbia

Figura 1: Esquema simplificado de processos aeróbios e anaeróbios

• Processos aeróbios: oxigênio como aceptor final de elétrons;
• Processos anaeróbios:
• Fermentativos: Utilizam produtos da degradação do substrato.
• Anóxicos: Utilizam compostos inorgânicos.

Rendimento Energético
Processos aeróbios > Processos anaeróbios

Métodos para avaliação de crescimento de microrganismos Fisiologia do microrganismo!

Métodos Diretos
• Determinação da concentração celular
• Contagem no microscópio;
• Contagens com cultura;
• Contagem eletrônica.

Não se aplicam a m.o. filamentosos CONTAGEM DIRETA
AO MICROSCÓPIO

CÂMARA DE NEUBAUER

Ao microscópio – aumento de 400X
Ao microscópio – aumento de 100X

Coloração com azul de metileno para evidenciar células viáveis de leveduras – células azuis estão mortas; células sem coloração são células vivas

CONTAGEM EM PLACA
E DILUIÇÕES
SERIADAS

METODOLOGIA
UTILIZADA PARA A
CONTAGEM DE COLÔNIAS
EM PLACA

POUR-PLATE

ESPALHAMENTO EM PLACA

Fonte de luz

Filtro

Amostra contendo células microbianas Detector sensível á luz

Leitura dos resultados em absorbância ou transmitância no espectrofotômetro

DETERMINAÇÃO DE CRESCIMENTO MICROBIANO POR
TURBIDIMETRIA

CURVA-PADRÃO PARA O CÁLCULO DE CRESCIMENTO
MICROBIANO POR TURBIDIMETRIA

↓
↓

A membrana filtrante foi colocada sobre o meio de cultura e a placa foi incubada.

Células bacterianas na superfície da membrana (poros)
CONTAGEM DE BACTÉRIAS PELO MÉTODO DE FILTRAÇÃO

MÉTODO DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL PARA ESTIMATIVA DE CRESCIMENTO

Métodos Indiretos

• Constituintes celulares (ATP, DNA, NADH);
• Dosagem de elementos do meio de cultura (substrato, consumo