relatorio de algo

A atividade laboratorial realizada teve como base a cromatografia de exclusão molecular, consistindo esta na separação de macromoléculas segundo a sua forma e tamanho através da eluição das mesmas num gel poroso. Quando as moléculas têm dimensões maiores que os poros do gel, não passam pelo interior do mesmo, ficando assim limitadas ao espaço exterior, o que significa que são mais rápidas a percorrer a coluna; já as moléculas de menores dimensões conseguem entrar nos poros do gel, mantendo o equilíbrio entre o efluente no interior e no exterior das partículas esféricas. Deste modo, demoram mais tempo a percorrer a coluna, uma vez que passam algum tempo no interior do gel, variando este tempo com o tamanho e a forma das moléculas. Assim, podemos isolar os vários componentes uma vez que cada um elui a uma velocidade diferente. Através da eleição do azul de dextrano concluímos que o volume morto da coluna é de 13mL, uma vez que este tem dimensões muito grandes o que não o permite penetrar no gel, eludindo rapidamente e apresentando um Kav nulo.Relativamente à mistura padrão, concluímos que o primeiro a ser eluído é o BSA pois tem uma massa molecular de 66400 Da, seguido pela mioglobina, cuja massa molecular é de 16900 Da e por fim o K2CrO4 com massa molecular igual a 184 Da. Deste modo, justificamos os valores de Kav 0,10; 0,44 e 0,89 respetivamente. Como o calor de Kav do cromato de potássio é aproximadamente 1, concluímos que o volume de eleição é igual ao volume total da coluna, ou seja 33,3 mL, embora experimentalmente o volume de eleição tenha dado 31mL, devendo-se a diferença a erros experimentais.
Com os valores de Kav dos componentes da mistura padrão elaborou-se uma reta de calibração através da qual foi possível calcular o valor da Mr da amostra desconhecida que se tratava do citocromo C (13 899 Da) e compara-lo com o valor real (12 233 Da) observando que se obteve um valor satisfatório muito próximo do real, concluído assim que se obteve sucesso