Protocolo - citogenética raiz de cebola

Aula prática: Visualização das fases de divisão celular em raízes de cebola.

Protocolo para preparação de raízes de cebola

As raízes devem ser cortadas e a cebola deve ser deixada na água, para crescimento de novas raízes. As raízes devem ser coletadas com aproximadamente 3 mm de comprimento, no período entre 10:30 e 11:00 da manhã. Período em que há maior índice mitótico para a espécie.
Após coletadas devem ser lavadas em água destilada 3 vezes ,por 5 minutos cada lavagem.
Coloca-las em Carnoy (etanol : ácido acético 3:1) por aproximadamente 30 minutos, trocar o fixador e, após 24 horas fazer uma última troca, sempre armazenando no freezer até o momento do uso.
Retirar as raízes do Carnoy e dar 3 banhos de 10 minutos cada em água destilada
Colocar HCl 1N em um eppendorf e levar ao banho-maria a 60ºC. Colocar as raízes no HCl pré-aquecido e retornar ao banho-maria durante 10 minutos. Lembrar sempre de aquecer o HCl antes de colocar as raízes. Enquanto isso colocar água destilada para gelar no freezer.
Retirar as raízes do HCl e dar um choque térmico com a água gelada, para que a reação de hidrólise seja paralisada.
Dar 3 banhos de 5 minutos cada com a mesma água destilada que foi gelada.

Protocolo para coloração com Giemsa

1. Técnica de esmagamento:

Transferir uma raiz seca (com cuidado para não encostar o meristema no papel filtro) para uma lâmina limpa com uma gota de ácido acético 45%
Separar apenas o meristema, descartando a coifa e o restante da raiz.
Picotar o meristema em pedaços menores quanto for possível, com cuidado para a solução não secar.
Cobrir o material com uma lamínula limpa e bater com firmeza sobre ela com o fundo de um pincel (ou palito de fósforo), tomando cuidado para que não arraste.
Dobrar 2 ou 3 folhar de papel filtro sobre a lâmina e esmagar com o polegar, no local onde foi colocada a lamínula. Novamente com cuidado para que não arraste
Congelar a lâmina até que fique esbranquiçada e retirar a lamínula