Fracionamento e dosagem de proteínas do leite

– BIOQUÍMICA Curso: Farmácia – 2013
EXPERIMENTO: Preparo de curva padrão de proteína e curva de calibração

FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
Espectrometria : baseia-se na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. A chamada radiação luminosa corresponde a uma gama de comprimentos de onda que vai desde o ultravioleta ao infravermelho no espectro da radiação eletromagnética.
Este procedimento necessita de um instrumento mais complicado, o espectrofotômetro, aparelho amplamente utilizado em laboratórios, cuja função é a de medir e comparar a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma determinada solução. É usado para medir (identificar e determinar) a concentração de substâncias, que absorvem energia radiante, em um solvente. Em geral, um espectrofotômetro possui uma fonte estável de energia radiante, um seletor de faixa espectral, um recipiente para colocar a amostra a ser analisada e um detector de radiação, que permite uma medida relativa da intensidade da luz. A base de um espectrofotômetro portanto é passar um feixe de luz através da amostra e fazer a medição da intensidade da luz que atinge o detector. O espectrofotômetro compara quantitativamente a fração de luz que passa através de uma solução de referência e uma solução teste. Esquema do funcionamento interno de um espectrofotômetro.

Lei Lambert: afirma que, quando a luz monocromática passa através de um meio transparente, a taxa de diminuição da intensidade com a espessura do meio é proporcional à intensidade da luz, isto é equivalente a afirmar que a intensidade da luz emitida diminui exponencialmente com a espessura do meio absorvedor, ou que qualquer camada do meio com uma certa espessura absorve sempre a mesma fração da luz incidente sobre ela. It = Io . e-kl , onde Io é a intensidade da luz incidente sobre o meio absorvedor de espessura