DNS

Páginas: 6 (1395 palavras) Publicado: 4 de maio de 2015
Comunicado 85
Técnico
Foto: Iriani Rodrigues Maldonade

ISSN 1414.9850
Março, 2013

Protocolo para determinação
de açúcares totais em
hortaliças pelo método
de DNS

Os carboidratos, juntamente com as proteínas
e lipídeos, são os constituintes principais dos
organismos vivos e são classificados em mono, oligo
e polissacarídeos além de serem fonte abundante de
energia. Os monossacarídeos sãocompostos que não
podem ser hidrolisados a compostos mais simples
como, por exemplo, a glicose (aldose) e frutose
(cetose). Os oligossacarídeos e os polissacarídeos
são formados por moléculas de monossacarídeos
unidas por ligações hemiacetálicas. Os testes de
açúcares são baseados em reações de óxido–
redução pelo grupo hidroxílico hemiacetálico do
monossacarídeo, que pode reagir com íons e formarcomplexos coloridos (BOBBIO e BOBBIO, 2005) ou
por reações coloridas provenientes da condensação
de produtos de degradação dos açúcares em ácidos
fortes com vários compostos orgânicos como
fenol e antrona. Os monossacarídeos são açúcares
redutores. O teste de DNS (ácido dinitrosalicílico)
baseia-se na reação entre o açúcar redutor e o ácido
3,5-dinitrosalicílico (cor amarelo), que é reduzido a
umcomposto colorido avermelhado, o ácido 3-amino5-nitrosalicílico, oxidando o monossacarídeo redutor
(Figura 1).

Figura: Iriani Maldonade

Iriani R. Maldonade1
Patrícia G. B. Carvalho2
Nathalie A. Ferreira3

Figura 1. Esquema das reações envolvidas no
método DNS.

Eng. alimentos, Ph.D em Ciência de alimentos, Pesquisadora – Embrapa Hortaliças, Brasília-DF – iriani.maldonade@embrapa.br
Bióloga, D.Sc.Biologia molecular, Pesquisadora – Embrapa Sede – DPD, Brasília-DF – patricia.carvalho@embrapa.br
3
Tecnóloga de Alimentos, MSc. em Nutrição Humana – Bolsista de doutorado – Embrapa Hortaliças, Universidade de Brasília (UnB) –
nathaliealfe@gmail.com
1
2

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Protocolo para determinação de açúcares totais em hortaliças pelo método de DNS

Neste trabalho, são relatadas as informações
necessárias para adeterminação de açúcares
redutores totais em hortaliças pelo método de DNS
com base em modificações e adaptações realizadas
no laboratório de Ciência e Tecnologia de Alimentos
da Embrapa Hortaliças.

Materiais Necessários
Reagentes
Glicose P.A.
Ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS)
Metabissulfito de sódio
Hidróxido de sódio (NaOH 2N)
Fenol
Ácido clorídrico (HCl 2N)
Tartarato duplo de sódio e potássiotetrahidratado
(KNaC4H4O6.4H2O)
Equipamentos e Vidrarias
Balança analítica
Banho termostático com circulação de água
Agitador de tubos de ensaio
Pipetas graduadas (1 mL, 10 mL e 20 mL)
Tubos de ensaio de 16 mL
Balão volumétrico de 100 mL
Béqueres diversos
Frascos âmbar
Cronômetro digital
Espectrofotômetro
Cubetas de vidro

Preparo de Soluções
Solução padrão de glicose ou frutose a 1,0 g/L
Pesarem balança analítica 0,1000 g de glicose ou
frutose, em seguida dissolver em aproximadamente
20 mL de água destilada sob agitação constante,
transferir analiticamente para um balão volumétrico
de 100 mL, completar o volume com água destilada
e homogeneizar vigorosamente. Esta solução deve
ser preparada e utilizada no dia da análise.
Reagente DNS
Para o preparo do reagente DNS, inicialmente pesar10,6 g de ácido 3,5 dinitrossalicílico e 19,8 g de
NaOH e dissolver em 1416 mL de água destilada.
Em seguida adicionar 7,6 mL de fenol (fundido
à 50 °C) e 8,3 g de metabissulfito de sódio.

Agitar e armazenar a solução em frasco âmbar em
refrigerador, por no máximo 30 dias.
Solução de tartarato duplo de sódio e potássio
Pesar 15,1 g de tartarato duplo de sódio e
potássio tetrahidratado (KNaC4H4O6 .4 H2O) e
dissolver em um litro de água destilada. Armazenar a
solução em frasco âmbar em temperatura ambiente
até 30 dias.
Solução de NaOH 2N
Pesar 40 g de hidróxido de sódio anidro, diluir em
água destilada e ajustar o volume para 500 mL, em
balão volumétrico.
Solução de HCl 2N
Medir 85 mL de ácido clorídrico (HCl) em uma
capela, diluir em água destilada e ajustar volume
para 500 mL, em balão...
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