bioquimicas - 4

Pré Relatório 4: Desnaturação e Precipitação de Proteínas - Atividade Enzimática Presente no Suco do Abacaxi sobre Gelatina (Colágeno)
OBJETIVO
Mostrar a atividade proteolítica presente no suco de abacaxi, o efeito da desnaturação proteica por temperatura e o efeito da alteração de solubilidade proteica e consequente precipitação provocados pela adição de álcool ou sal de amônio em solução de gelatina (colágeno). II) MATERIAIS UTILIZADOS
Materiais
8 tubos de ensaio de 20 mL
1 tubo de ensaio de 30 mL
Béquer de vidro de 100 mL (para aquecer água)
Béquer de 25 ou 50 mL (para água destilada)
Funil de vidro pequeno e papel de filtro, tesoura para cortar o papel de filtro
Recipiente com gelo
Almofariz e pistilo
Pipetadores automáticos de 1,0 mL e ponteiras, ou pipetas de vidro de 5,0 mL
Faca ou estilete
Luvas de látex
Bastão de vidro (para dissolver a gelatina)
Placa aquecida ou banho-maria 100oC
Banho-maria 60oC e Banho-maria 30oC
Balança
Reagentes
Solução de sulfato de amônio 3 mol/L
Etanol absoluto ou comercial 99,3o INPM
Abacaxi maduro (1 fatia média)
Gelatina incolor e sem sabor
Água destilada
PROCEDIMENTOS
Parte 1: Atividade enzimática do suco de abacaxi e desnaturação proteica por aquecimento.
Extração do suco de abacaxi
- Macera-se pedaços de abacaxi com o auxílio do almofariz e do pistilo, até que uma boa quantidade de suco for produzida.
- Filtrar o suco em funil de vidro com papel de filtro dentro de um tubo de ensaio de 20mL que se encontra em um béquer com gelo para manter as propriedades do suco de abacaxi.
Preparação da gelatina
- Pesa-se 2g de gelatina incolor sem sabor e dissolver em 20mL de água destilada em um béquer com a ajuda do bastão de vidro.
- Após total solubilização a gelatina derretida deve ser transferida para um tubo de 30mL e levada à estufa de banho maria à 60°C.
- A gelatina ficará na estufa até o momento da sua utilização.
Ensaio
- Primeiramente, deve-se preparar as amostras de