Técnica de Gram

Técnica de Gram
Coloração de gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microorganismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico, a técnica de coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite distinguir os dois principais grupos de bactérias por microscopia óptica. As que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas de Gram-negativas. A técnica de gram é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo muito utilizada atualmente, como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.
A técnica de coloração de Gram consiste em expor as células bacterianas à seguinte sequência:
1) corante primário: violeta de cristal
É o primeiro a ser usado e cora todas as células de violeta.
2) mordente: lugol - solução de iodo
Este reagente é uma substância que forma um complexo insolúvel ligando-se ao corante primário. O complexo resultante serve para intensificar a cor do corante, ou seja, o lugol ajuda o cristal de violeta a penetrar nas células e a resistir à descoloração. Nas bactérias Gram positivo este complexo é mais difícil de ser removido do que nas bactérias Gram negativo.
3) descorante: álcool etílico a 95 %
Este reagente serve de solvente de lípidos e de agente desidratante das proteínas. Assim, a sua ação é determinada pela concentração lipídica das paredes celulares microbianas.
Nas células Gram positivo a concentração baixa de lípidos é importante para reter o complexo corante-mordente. Os lípidos são dissolvidos pela ação do álcool causando a formação de pequenos poros na parede celular. Mas estes são prontamente fechados pela ação desidratadora do álcool e como consequência o corante primário é difícil de ser removido e as células mantêm-se violetas.
Nas células Gram negativo a alta concentração de lipidos na membrana externa da parede celular é dissolvida pelo álcool, formando-se grandes poros na parede celular que não fecham