Testes moleculares

TESTES MOLECULARES
CHAGAS
Embora tenham ocorrido aprimoramentos no diagnóstico parasitológico da doença de Chagas crônica, a baixa sensibilidade dos exames indiretos é uma limitação para sua aplicação ao diagnóstico. Assim, métodos baseados na biologia molecular, sobretudo a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) podem ser uma ferramenta importante para a detecção rápida de microrganismos.
A PCR reproduz in vitro a habilidade natural de replicação do DNA, podendo ser repetida em larga escala. A metodologia requer o conhecimento, pelo menos parcial, do DNA alvo de um determinado organismo para o desenvolvimento de oligonucleotídeos iniciadores (primers) que irão hibridizarse especificamente com a seqüência alvo.
Vários grupos de pesquisa têm avaliado a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) que apresenta uma alta sensibilidade e especificidade na amplificação de seqüências tanto de DNA do cinetoplasto quanto DNA nuclear de T. cruzi. Uma grande vantagem desta técnica é a obtenção dos resultados em tempo mínimo, ao contrário dos métodos parasitológicos indiretos.
Mais recentemente, a PCR sofreu um extraordinário avanço, com o desenvolvimento de métodos quantitativos automatizados, baseados em sondas fluorescentes e de aparelhagens capazes de monitorar em tempo real a reação de amplificação. O sistema TaqMan de PCR em tempo real fornece dados quantitativos precisos sem necessidade de análise bioquímica posterior dos produtos amplificados, evitando desta forma os riscos de contaminação laboratorial pelos amplicons, um dos problemas inerentes à tecnologia de PCR.
Os fundamentos apresentados levam à hipótese de que ensaios moleculares de PCR em tempo real são úteis na demonstração dos níveis absolutos de T. cruzi circulantes em indivíduos infectados, permitindo descrever uma possível associação entre a carga parasitária e formas clínicas da doença de Chagas. Além disso, ensaios de PCR em tempo real são mais vantajosos em relação ao PCR convencional, no que tange a: (i)