tecnicas de contagem microbiologia

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE TECNOLOGIA E GEOCIÊNCIAS
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUÍMICA
DISCIPLINA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

TÉCNICAS DE CONTAGEM

Professora: Olga Martins Marques

Recife, Abril de 2013
OBJETIVOS
Determinar a concentração de células de leveduras pelo uso das seguintes técnicas: Técnica do Plaqueamento, Contagem direta ao microscópio (pelo uso da câmara de Neubauer),e por turbidimetria.

MATERIAIS

1 - Contagem de Células Viáveis pela Técnica do Plaqueamento:
- Amostra: Saccharomyces cervisiae (solução de fermento prensado em água);
- Meio de cultura: Glicose Agar;
- Diversos: Pipetas de 1ml, Placas de Petri, tubos de ensaio com 9ml de água estéril, Erlenmeyer com 99ml de água estéril, Bico de Bunsen.

2 – Concentração Celular e Contagem de Células Viáveis de Leveduras pelo Uso da Câmara de Neubauer:
- Microrganismo: Cultura de Saccharomyces cervisiae;
- Reagentes: Solução salina fisiológica (0,85% NaCl);
-Equipamentos:Microscópio ótico comum, Câmara de contagem de Neubauer e Bico de Bunsen;
- Diversos: Pipeta Pasteur.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
1 - Contagem de Células Viáveis pela Técnica do Plaqueamento:

para a contagem em placa, da amostra contendo a cultura S. cerevisiae fazer diluições até 1x10-7 e plaquear em duplicata 1ml das diluições de 1x 10-4 a 1x10-7;

colocar 1 ml de cada diluição em placas e adicionar 10-20ml de meio de cultura (GA) , homogeneizar, esperar solidificar;

incubar a temperatura ambiente por 24-48 horas.

Esquema de diluição da técnica das diluições sucessivas

2 – Concentração Celular e Contagem de Células Viáveis de Leveduras pelo Uso da Câmara de Neubauer:

Pipeta 1ml da amostra de suspensão celular para um tubo de ensaio;
Adicionar 1ml de corante celular (solução 0,02% de azul de metileno em solução a 2% de citrato de sódio)
Homogeneizar e deixar em