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Introdução

A técnica de coloração de Gram permite distinguir células bacterianas quanto à composição das suas paredes celulares facilitando a observação morfológica das próprias células, diferenciando dois grandes Filos das Eubactérias: as Gram negativas e as Gram positivas. O processo se baseia na coloração do esfregaço das células pelo corante violeta e a descoloração das Gram negativas, devido a sua membrana externa fosfolipídica e absorção desta do segundo corante. Podendo assim diferenciar os dois Filos, cada um com uma coloração.
Esta coloração é um dos critérios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois esta diferença de comportamento é atribuída a diferenças na composição da parede celular.

Objetivo
Mostrar a técnica de coloração de Gram em células bacterianas.

Material e Métodos
Material:
Microscópios
Alça de platina
Pipeta Pasteur
Bico de Bunsen
Lâmina
Corantes: Cristal Violeta e Fucsina
Mordente: Lugol fraco
Descorante: Álcool/ Cetona
10 tubos de ensaio com água esterilizada
Béquers (50 mL ou 10 mL) contendo uma pequena quantidade de solução (corante, mordente, solução lavagem)
Cotonetes esterilizados ( 40 unidades) – em autoclave ( para não derreter)
Picetas com água destilada
Picetas com álcool 70%
Solução de levedura (Sacharomyces cereviseae)
Câmara de Neubauer
Método:
1- Esfregaço
Adicionar uma gota de água destilada sobre uma lâmina higienizada por etanol 70%.
Passar o cotonete asséptico na boca ou nariz e esfregá-lo sobre a gota na lâmina. Espalhar a amostra pela lâmina, do centro para as extremidades.
Esperar secar.
Passar a lâmina três vezes pela chama. ( Fixação da amostra)

2- Coloração de Gram
Adicionar cristal violeta sobre o esfregaço de células. Deixar agir por 1 min. Lavar com água destilada (fluxo pequeno da água, pois senão poderá remover o micro-organismo da lâmina).
Adicionar o lugol(mordente). Deixar agir por 1min. Lavar com água destilada.
Lavar o esfregaço com solução descorante (álcool- cetona). Lavar com água