Meios

Biotecnologia Vegetal
Métodos e Técnicas
Laboratoriais em Biologia

Universidade de Évora

Prof. Amely Zavattieri

2002

Meios de Cultura
Composição
Preparação
Esterilização

O MEIO DE CULTURA
O meio nutritivo é composto por componentes essenciais e opcionais

Sais inorgânicos

Essenciais

Hidratos de Carbono

Vitaminas

ÁGUA

Opcionais

Reguladores de crescimento Azoto orgânico
Ácidos orgânicos

Substâncias complexas

!Composição variável em função das dimensões do explant inicial

ÁGUA
!Componente básico de todos os meios de cultura, a qualidade da água utilizada é condição sine qua non, para se obter sucesso na cultura de tecidos.

!Mais do que qualquer outro constituinte dos meios, a água pode contribuir com impurezas que podem por em causa a sua utilização: -Sais minerais
-Compostos orgânicos
-Óleos
-Produtos corrosivos
-Metais pesados

!Métodos de purificação da água
"Desmineralização: através da passagem da água numa coluna de resinas de troca catiónica e aniónica, obtém-se água livre de sais minerais (EC < 2µS/cm).

"Destilação: processo clássico de purificação da água que permite eliminar os compostos orgânicos, ainda que não seja
100% eficaz para a remoção da componente mineral

"Osmose inversa: Neste sistema, a água é separada dos microorganismos em suspensão e moléculas de elevado peso molecular, quando é forçada a passar através de uma membrana permeável, devido a um diferencial de gradientes de pressão.

AGENTES GELIFICANTES
!Ágar: produto natural extraído das algas
!Gelrite: agente gelificante (hetero-polissacárido) produzido pela bactéria Pseudomonas elodea

!Concentração de ágar
Vs.
Potencial hídrico

!Concentração em ágar e características do meio
Um gel duro, por excesso de ágar é frequentemente nefasto para o crescimento dos tecidos. Por outro lado, os meios com baixa concentração em ágar perdem água facilmente por evaporação, sendo por outro lado difícil manter neles os explants correctamente posicionados. A escolha da quantidade de ágar