Isolamento de fungos

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Isolamento de Fungos

O isolamento de fungos pode ser feito diretamente a partir de algum substrato ou de um compartimento ambiental (ar, água, solo), utilizando vidraria (tubos de ensaio, placas de petri) e instrumentos (estiletes, pinças, agulhas) esterilizados, com a manipulação em uma zona de segurança próximo a uma chama e/ou em uma câmara de fluxo laminar. Para que ocorra o isolamentodos fungos, é necessário oferecer condições propícias para o desenvolvimento dos mesmos. O isolamento pode ser realizado a partir de câmaras úmidas (recipiente semi-fechado com fonte de umidade (ex. placas de petri forradas com papel filtro embebido com água destilada estéril) ou a partir de um meio de cultura sólido ou líquido, semi-sintético ou sintético (ex. tubos de ensaio ou placas de petricontendo meio de cultura).

Protocolos das técnicas

Placa de solo:

1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Flambar as bordas de uma placa de petri esterilizada
3. Abrir a placa de petri e colocar, com uma espátula, uma quantidade bem pequena de solo na placa de petri
4. Colocar 1 ml de água destilada esterilizada e misturar, com movimentos circulares, aporção de solo com a água
5. Verter meio de cultura com antibiótico, ainda líquido, a uma temperatura aproximada de 40°C, sobre a placa de petri com a solução de solo
6. Espalhar o meio de cultura, fazendo movimentos circulares com a placa de petri
7. Tampar imediatamente a placa de petri
8. Flambar as bordas da placa de petri


Diluição de solo

1. Identificar as placas de petri (data,nome da técnica, nome do grupo)
2. Retirar o capuchão de um tubo de ensaio esterilizado com 9 ml de água destilada
3. Flambar a abertura do tubo de ensaio
4. Colocar 1 g de solo no tubo de ensaio com uma espátula
5. Repetir o passo 3
6. Fechar o tubo de ensaio com o capuchão
7. Agitar o tubo de ensaio para homogeneizar a solução de solo
8. Identificar o tubo de ensaio, marcando 1:10
9.Retirar 1 ml da solução de solo do primeiro tubo
10. Verter este 1 ml de solução de solo do primeiro tubo em um segundo tubo
11. Repetir os passos 3, 6 e 7 (obs.: a cada nova diluição os valores aumentam 10x: tubo 2, 1:100; tubo 3, 1:1000; etc.)
12. Flambar as bordas de uma placa de petri com meio de cultura
13. Levantar a tampa até um ângulo máximo de 45°
14. Verter 1ml do primeiro tubo deensaio na placa de petri
15. Espalhar o líquido, fazendo movimentos circulares com a placa de petri
16. Tampar imediatamente a placa de petri
17. Flambar as bordas da placa de petri
18. Repetir os passos 12 a 17 para todos os tubos
Exposição de placas de petri com meio de cultura sólido ao ar

1. Selecionar 3 placas de petri com meio de cultura
2. Identificar cada placa de petri, marcandoum I (ambiente interno) em todas e os números 5', 10' e 15' em cada uma delas (e também com data, nome da técnica, nome do grupo)
3. Repetir os passos 1 e 2 para outras 3 placas, substituindo o I por um E (ambiente externo)
4. No ambiente interno (sala de aula), abrir simultaneamente as tampas das 3 placas (marcadas com I), deixando as tampas viradas para baixo sobre uma superfície
5. Tampar aplaca marcada com 5' após 5 min, a de 10' após 10 min e a de 15' após 15 min
6. Repetir os passos 4 e 5 em um ambiente externo (área verde) com as placas marcadas com E


Iscagem com substratos orgânicos I (água de corpo aquático)

1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome do grupo)
2. Preparar as iscas: (a) cortar as sementes ao meio, (b) cortar em pequenos pedaços ascascas de cebola, ecdises de cobra, papel celofane etc.
3. Abrir uma placa de petri
4. Verter a água coletada em um corpo aquático até preencher a metade da altura da placa de petri
5. Colocar os diversos tipos de iscas na placa de petri
6. Tampar a placa de petri


Iscagem com substratos orgânicos II (solo + água destilada)

1. Identificar a placa de petri (data, nome da técnica, nome...
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