Imunologia aula pratica 5

PONTIFICIA UNIVERSIDADE CATOLICA DE MINAS GERAIS- UNIDADE BETIM.
CIÊNCIAS BIOLOGICAS COM ENFASE EM GESTAO AMBIENTAL.
Ciências Biológicas – Imunologia- Aula pratica 6

Obtenção de células da cavidade peritoneal: preparo para cultivo celular

Guilherme Gelape
Lorena Cristina
Luis Ricardo
Marcela Dias; Patricia Prado;
Priscila Dayane;
Tatiana de Souza;
Thays Cristina Betim 2011
1- Procure na literatura uma forma de se medir: -a atividade fagocítica dos macrófagos OU a atividade de linfócitos T. Explique a base da técnica. A diatermia de ondas curtas pulsadas (DOCP) e do campo magnético (CM) de freqüência ultra baixo pode ser usada para medir a atividade fagocítica dos macrófagos.

Outro método utilizado é o descrito por Pipe et al. (1995). Onde se deposita 100 μL da solução de macrófagos e neutrófilos obtidos como descrito acima, em placa do tipo ELISA e adicionado 10 μL de zimosan (2,3 x 108 partículas/mL) corado com vermelho neutro e incubado por 30 minutos. Após este procedimento, são adicionados 100 μL de fixador para interromper o processo de fagocitose e 30 minutos depois, a placa deve ser lavada com PBS e em seguida, centrifugada, por 5 minutos a 1.500 rpm, a fim de remover o zimosan e o vermelho neutro não fagocitados pelos macrófagos. O vermelho neutro no interior dos fagócitos foi solubilizado utilizando-se 100 μL de solução de extração. Após 30 minutos, é feita a leitura das placas, a 550 nm utilizando espectrofotômetro (Microplate reader Bio-rad - Benchmark).

2- Explique porque o azul de Trypan só cora células não viáveis.
O corante permite que se diferenciem células vivas de mortas. Ele cora somente células não viáveis, ou mortas devido a presença da bomba de potássio inativa. Se a células estivessem vivas ele tentaria corá-la, mas devido a sua bomba de potássio ativa ela não deixaria ser corada. Sendo assim, percebe-se se em seu experimento tem muitas células viáveis ou inviáveis. 3- explique,