Imunologia aula pratica 5

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PONTIFICIA UNIVERSIDADE CATOLICA DE MINAS GERAIS- UNIDADE BETIM.
CIÊNCIAS BIOLOGICAS COM ENFASE EM GESTAO AMBIENTAL.
Ciências Biológicas – Imunologia- Aula pratica 6

 
 
 
Obtenção de célulasda cavidade peritoneal: preparo para cultivo celular

Guilherme Gelape
Lorena Cristina
Luis Ricardo
Marcela Dias;
Patricia Prado;
Priscila Dayane;
Tatiana de Souza;
Thays CristinaBetim 2011
1- Procure na literatura uma forma de se medir:
-a atividade fagocítica dos macrófagos OU a atividade de linfócitos T. Explique a base da técnica.

A diatermia de ondas curtaspulsadas (DOCP) e do campo magnético (CM) de freqüência ultra baixo pode ser usada para medir a atividade fagocítica dos macrófagos.

Outro método utilizado é o descrito por Pipe et al. (1995). Onde sedeposita 100 μL da solução de macrófagos e neutrófilos obtidos como descrito
acima, em placa do tipo ELISA e adicionado 10 μL de zimosan (2,3 x 108
partículas/mL) corado com vermelho neutro eincubado por 30 minutos. Após este procedimento, são adicionados 100 μL de fixador para interromper o processo de fagocitose e 30 minutos depois, a placa deve ser lavada com PBS e em seguida,centrifugada, por 5 minutos a 1.500 rpm, a fim de remover o zimosan e o vermelho neutro não fagocitados pelos macrófagos. O vermelho neutro no interior dos fagócitos foi solubilizado utilizando-se 100 μL desolução de extração. Após 30 minutos, é feita a leitura das placas, a 550 nm utilizando espectrofotômetro (Microplate reader Bio-rad - Benchmark).


2- Explique porque o azul de Trypan só coracélulas não viáveis.
O corante permite que se diferenciem células vivas de mortas. Ele cora somente células não viáveis, ou mortas devido a presença da bomba de potássio inativa. Se a células estivessemvivas ele tentaria corá-la, mas devido a sua bomba de potássio ativa ela não deixaria ser corada. Sendo assim, percebe-se se em seu experimento tem muitas células viáveis ou inviáveis.
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