hole

Detecção da fermentação Maloláctica
Método de cromatografia de papel

Materiais
Papel de cromatografia Whatman nº1
Micropipeta de 5
Tina de cromatografia

Reagentes
Solução 0,1% de Azul de Bromofenol em álcool n-Butílico
Solução aquosa de ácido glacial 50%
Padrões de ác. Tartárico, ác. Málico e ác. Láctico em solução aquosa a 0,1%
Procedimentos
1. Começamos por cortar um rectângulo de papel de cromatografia Whatman nº 1 de 21x13cm e traçar a lápis uma linha a 3 cm do bordo mais comprido.
2. De seguida marcamos sobre a linha vários pontos distanciados entre si 3cm, de acordo com o número de amostras a analisar e o número de padrões a utilizar.
3. Com a micropipeta depositamos sobre os pontos marcados, 5 a 10 dos padrões de ácido e das amostras de vinho a analisar.
4. De seguida introduzimos na tina de cromatografia 50ml de solução de azul de Bromofenol + 20ml da solução de ác. Acético a 50%. Esta era o nosso eluente.
5. Enrolamos o papel em forma de cilindro e agrafamos as duas extremidades.
6. Introduzimos o papel no interior da tina, com o lado das amostras mergulhado no eluente.
7. Deixamos que a frente do eluente desenvolva até cerca de 1cm do topo.
8. Retiramos o cromatograma deixando o secar num local arejado.
9. No final o cromatograma aparece com manchas amarelas correspondentes aos ácidos, sobre um fundo azul dado pelo indicador Bromofenol.
10. Para conseguirmos determinar os ácidos presentes nas amostras, comparamos as manchas desenvolvidas nas amostras com as dos padrões, ou então determinamos os valores de Rf a partir do centro mas manchas , sendo que