Cromatografia de fase normal

Cromatografia de fase normal A cromatografia de fase normal foi o primeiro tipo de sistema HPLC utilizado no campo da química, e caracteriza-se por separar os compostos em base a sua polaridade. Esta técnica utiliza uma fase estacionária polar e uma fase móvel apolar, e utiliza-se quando o composto de interesse é bastante polar. O composto polar associa-se e é retido pela fase estacionária. A força de absorção aumenta à medida que aumenta a polaridade do composto e a interação entre o composto polar e a fase estacionária polar (em comparação à fase móvel) aumenta o tempo de retenção. A força de interação não só depende dos grupos funcionais do composto de interesse, se não também em fatores esotéricos de forma que os isómeros estruturais com frequência se pode diferenciar o um do outro. A utilização de solventes mais polares na fase móvel diminui o tempo de retenção dos compostos enquanto os solventes mais hidrofóbicos tendem a aumentar o tempo de retenção. A NP-HPLC caiu em desuso aos anos setenta com o desenvolvimento do HPLC de fase reversa HPLC devido à falta de reprodutibilidade dos tempos de retenção já que os solventes paróticos mudavam o estado de hidratação da sílica ou alumínio da cromatografia. Cromatografia de fase reversa A HPLC de fase reversa (RP-HPLC) consiste em uma fase imóvel apolar e uma fase móvel de polaridade moderada. Uma das fases estacionárias mais comuns deste tipo de cromatografia é a sílica tratada com RMe2SiCl, onde o R é uma corrente alquil tal como C18H37ou C8H17. O tempo de retenção é maior para as moléculas de natureza apolar, enquanto as moléculas de caráter polar elui mais rapidamente. O tempo de retenção aumenta com a adição de solvente apolar à fase móvel e diminui com a introdução de solventes mas hidrofóbicos. A cromatografia de fase reversa é tão utilizada que com frequência lhe denomina HPLC sem nenhuma especificação adicional. A cromatografia de fase reversa baseia-se no princípio das interações