Caracterização da atividade da enzima Fosfatase

Bioquímica
Fisiológica I

CARACTERIZAÇÃO
CINÉTICA DA ENZIMA
FOSFATASE ÁCIDA

Adriana Camões
Ana Rita Gomes
João Matos
Patrícia Frias
Turma 2, Grupo 1

OBJECTIVOS
Identificar qual o inibidor, o seu tipo (competitivo, não competitivo ou misto) e a influência deste nas reacções;  Determinar a velocidade da reacção em função da concentração de substrato, com base na quantidade de produto formado.

INIBIÇÃO
Competitiva
Afinidade

↓

Não
Competitiva
=

Mista

Km

↑

=

↑

Vmáx

=

↓

↓

↓

VALORES DE ABSORVÂNCIA

Sem Inibidor

Com Inibidor
(Na2AsO4 5 mM)

Concentra
Concentra
Absorvânci ção de ção de a (405
Produto
Produto nm) (M)
(M)

Tubo

Absorvânci a (405 nm) 1

0.000

0.000

0.000

0.000

2

0.291

1.55x10-5

0.029

1.54x10-6

3

0.368

1.96x10-5

0.033

1.76x10-6

4

0.602

3.20x10-5

0.106

5.64x10-6

5

0.603

3.21x10-5

0.114

6.06x10-6

6

0.633

3.37x10-5

0.257

1.37x10-5

7

0.673

3.18x10-5

0.425

2.26x10-5

8

0.758

4.03x10-5

0.602

3.20x10-5

CONVERSÃO DOS VALORES DE
ABSORVÂNCIA EM CONCENTRAÇÕES
MOLARES DE P-NITROFENOLATO = bc, sendo que
A

= 1,88x104 litro.mole-1cm-1 e b = 1 cm.

Como exemplo usámos o tubo número 2 (Sem inibidor):
0,291 = 1,88x104 x1xc  c = 1,55x10-5 M

V = ∆[P] / ∆ t
Como exemplo usámos o tubo número 2 (Sem inibidor):
V =1,55x10-5/15  v = 1,03x10-6 M/min

CÁLCULOS PARA A
CONCENTRAÇÃO DE
SUBSTRATO
Ci x Vi = Cf x Vf
Como exemplo, usámos o tubo 2 (sem inibidor): ci= 9 mM = 9x10-3 M
Vi= 0,025 ml = 2,5x10-5 L cf=? Vf= 0,025+0,5+3,5+0,5 = 4,525 ml = 4,525x10 -3 L

9x10-3 x 2,5x10-5 = cf x 4,525x10-3  cf ≈ 4,97x10-5 M

CONCENTRAÇÃO DE
SUBSTRATO

Tubo

1
2
3
4
5
6
7
8

Sem Inibidor
Concentração
de Substrato
(M)
0.000
4.97x10-5
1.00x10-4
2.00x10-4
4.00x10-4
8.00x10-4
2.00x10-3
5.00x10-3

Velocidade da
Reacção