Biologia

TÉCNICAS BÁSICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Sandra Regina Ceccato Antonini Silvana Perissatto Meneghin Alfredo Seiiti Urashima

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COORDENADORES • Profª Sandra Regina Ceccato Antonini – Doutora no Depto.Tecnologia

Agroindustrial e Sócio-economia Rural, CCA/UFSCar, com pós-doutorado em genética molecular de leveduras na Universidade de Sheffield, Inglaterra. • Profª Silvana Perissatto Meneghin – Assistente no Depto.

Biotecnologia Vegetal, CCA/UFSCar, doutoranda em Microbiologia. • Prof. Alfredo Seiiti Urashima Doutor no Depto. Biotecnologia

Vegetal, CCA/UFSCar, com pós-doutorado em fitopatologia e biologia molecular na Universidade de Kobe, Japão.

Esta apostila se refere ao curso de extensão universitária “Técnicas básicas de biologia molecular”, oferecido no período de 12 a 16 de julho de 2004, no Laboratório de Microbiologia Agrícola e Molecular (LAMAM), Depto. Biotecnologia Vegetal / Depto. Tecnologia Agroindustrial e Sócio-Economia Rural, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de São Carlos.

Endereço:

LAMAM - UFSCar Via Anhanguera, km 174 – Fone : (19) 3543-2612 / 3543-2614 13600-970 – Araras - SP e-mail: [e-mail]

Julho/2004

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INDICE

1. Introdução………………………………………………………………… 2. Segurança no laboratório e disposição de resíduos perigosos…… 3. Introdução à biologia molecular e marcadores moleculares………..

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4. Extração de DNA genômico total…………………………...………….. 24 5. Quantificação de DNA…………………………………………………... 6. Reação PCR……………………………………………………………... 7. Polimorfismo por RAPD………………………………………………… 8. Polimorfismo por RFLP………………………………………………… 9. Análise dos resultados………………………………………………… 10. Bibliografia………………………………………………………………. 11. Preparo de soluções…………………………………………………… 26 29 33 37 45 48 49

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1. INTRODUÇÃO

Há várias técnicas em biologia molecular usadas numa ampla variedade de estudos tais como genética de populações, estudos sobre evolução ou filogenia, mapeamento e expressão gênica. Fica difícil