Apostila de microbiologia

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  • Publicado : 28 de março de 2012
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MICROBIOLOGIA GERAL

Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-los.

Isolamento e Cultivo de Culturas Puras
Os microrganismos na natureza normalmente existem em cultura mistas, com muitas espéciesdiferentes ocupando o mesmo ambiente. Ao determinar as características de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou seja, em que todas as células na população são idênticas no sentido de que elas se originaram de uma mesma célula parental. Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende devários fatores:
* considerações sobre a origem do material a ser analisado
* a espécie que se imagina estar presente nesta amostra
* as necessidades nutricionais dos organismos

Técnicas de isolamento de microrganismos:
O material a ser analizado é colocado no meio de cultura - inóculo - O processo de inoculação pode ser feito mediante:
* técnica de esgotamento por meio de estriassuperficiais - a amostra é semeada na superfície do meio solidificado com uma alça de semeadura para esgotar a população, assim em algumas regiões do meio, células individuais estarão presentes.
* técnica de semeadura em superfície - uma gota da amostra diluida é colocada na superfície do ágar e com o auxílio de uma alça de semeadura de vidro (alça de Drigalky) esta gota é espalhada sobre omeio.
* método de pour-plate - a amostra é diluida em tubos contendo meios liquefeitos (45 oC). Após homogeneização são distribuidos em placas de Petri; e após a solidificação dos meios as placas são incubadas. As colônias se desenvolverão tanto acima quanto abaixo da superfície (colônias internas).

Em cada uma dessas técnicas o objetivo é diminuir a população microbiana, assim as célulasindividuais estarão localizadas a uma certa distância umas das outras. As células individuais, se estiverem distante o suficiente, produzirão uma colônia que não entra em contato com outras colônias. Todas as células em uma colônia têm o mesmo parentesco. Para isolar uma cultura pura, uma colônia individual é transferida do meio para um tubo de ensaio.

Conservação das Culturas Puras
Uma vezque os microrganismos tenham sido isolados em cultura pura, é necessário manter as culturas vivas por um período de tempo com o objetivo de estudá-las.
Para armazenar por um período curto, as culturas podem ser mantidas à temperatura de refrigeradores (4 a 10 oC). Para armazenar por um período longo, as culturas são mantidas em nitrogênio líquido (-196 oC) ou em freezers (-70 a -120 oC), ou aindacongeladas, e então desidratadas e fechadas à vácuo em um processo denominado liofilização.

Alguns dos mais usados métodos de conservação:
* transferência periódica para meios novos
* sob camada de óleo mineral
* liofilização
* congelamento

As coleções de culturas são bancos de microrganismos e outras células que estão à disposição de pesquisadores, professores,investigadores de patentes, e todo aquele que necessite estudar um tipo particular de microrganismos - um conjunto de células de referência de uma coleção de cultura padrão. As células são congeladas em cubas de nitrogênio líquido ou liofilizadas para resistir a qualquer variação que possa destruir a identidade da célula original.

Preparo dos Microrganismos para a Microscopia Luminosa
Existem doismétodos gerais utilizados para preparar espécimes microbiológicas para observação por meio do microscópico luminoso.
* Técnica entre lâmina e lamínula e gota pendente - utiliza uma suspensão de microrganismos vivos em uma gota ou uma camada líquida. Estas preparações (a fresco) são especialmente úteis quando a estrutura de um microrganismo pode ser distorcida pelo calor ou agentes químicos, ou...
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