Gel de agarose

br/conteudos/Biotecnologia/eletroforese.php Separando fragmentos de DNA: eletroforese em gel Como vimos no item anterior, os fragmentos de DNA formados com a ação das enzimas de restrição possuem tamanhos diferentes. A técnica de separação dos fragmentos de DNA mais utilizada é a eletroforese através de géis de agarose. A agarose é um polissacarídeo (como ágar e pectina) que dissolve em água fervente e então gelifica quando esfria como a gelatina. Para realizar uma eletroforese, um gel de agarose é preparado, o DNA é introduzido em pequenos poços de gel, e então uma corrente elétrica é aplicada através do gel. Como oDNA é negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo positivo. Entretanto, para chegar ao eletrodo positivo, o DNA deve migrar através do gel de agarose. Os fragmentos de DNA menores podem migrar através de um gel de agarose mais rapidamente que os fragmentos de DNA maiores. A velocidade de migração de fragmentos de DNA lineares através da agarose é inversamente proporcional a log10 de seus pesos moleculares. É possível calcular o tamanho exato de um dado fragmento com base na sua razão de migração.Após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluorece (torna-se visível) vivamente em contato com a luz ultravioleta. Dessa forma pode-se localizar as bandas que correspondem ao DNA. Os fragmentos de DNA podem, então, ser isolados e purificados a partir dos géis de…

O tamanho do DNA determina a taxa na qual ele passa através do gel, permitindo uma separação efetiva de mistura de fragmentos. De modo geral os fabricantes de cubas sugerem valores ideais em volts, que variam na faixa de 50 a 150V, dependendo do tamanho da cuba (8 a, 10v por cm). O brometo de etidium intercala-se com a molécula de DNA a cada 2,5 bp do fragmento, após sua inserção esse exerce uma ligação do tipo van der Waals. A radiação UV é capaz de estimular essa ligação entre o DNA…

técnica electrizante Laboratório Virtual de Biotecnologia Introdução moléculas de DNA que se encontrem A electroforese é uma das técnicas em suspensão numa solução básicas da Biologia molecular e é uma electrolítica (isto é, que possua iões das mais utilizadas pelos cientistas no livres) podem ser separadas através seu técnica da aplicação de uma dada voltagem. permite a separação de moléculas de No final do processo, as cadeias de diferentes tamanhos. Antes do seu DNA…

A ANÁLISE DE DNA POR ELETROFORESE Co – autores: Elisete Marcia Corrêa Patrícia Abrão Possik Eletroforese de DNA em gel A análise de DNA por eletroforese é uma das técnicas fundamentais nos laboratórios de pesquisa e de diagnóstico. O princípio é baseado no fato da molécula de DNA possuir carga negativa em valores de pH neutro ou alcalino e consequentemente, quando aplicado ou imerso em uma matriz de gel submetida a um campo elétrico, migra em direção ao pólo positivo (anôdo). A…

A ANÁLISE DE DNA POR ELETROFORESE Co – autores: Elisete Marcia Corrêa Patrícia Abrão Possik Eletroforese de DNA em gel A análise de DNA por eletroforese é uma das técnicas fundamentais nos laboratórios de pesquisa e de diagnóstico. O princípio é baseado no fato da molécula de DNA possuir carga negativa em valores de pH neutro ou alcalino e consequentemente, quando aplicado ou imerso em uma matriz de gel submetida a um campo elétrico, migra em direção ao pólo positivo…

ser visualizadas por exame direto de gel na luz ultravioleta. Uma molécula de DNA, quando exposta a um campo elétrico, migra para o eletrodo na velocidade ou mobilidade eletroforética, proporcional a força do campo e a carga líquida da molécula. A mobilidade eletroforética é também inversamente proporcional ao coeficiente friccional da molécula, que, por sua vez, é função do tamanho e forma da molécula, e da viscosidade do meio. Portanto, uma mistura de moléculas diferentes pode ser…

ELETROFORESE A eletroforese é o termo que referencia a migração de uma molécula carregada sob a influência de um campo elétrico. Algumas moléculas como os aminoácidos, peptídeos, proteínas, nucleotídeos e ácidos nucleicos se tornam ionizáveis a partir de certo grau de PH, fazendo com que estas moléculas obtenham cargas positivas e negativas que serão capazes de se separar pela influencia de um campo eletromagnético. No sistema de eletroforese ilustrado na figura xxxx, uma amostra de…

ebulição a 100ºC, enquanto o éter comum ferve a apenas 36ºC. Isso ocorre porque as moléculas de água devem se atrair com muito mais força que as moléculas do éter. Quanto mais forte Maior será a Mair será a a atração entre as energia necessária temperatura moléculas para afasta-lás de ebulição As ligações entre as moléculas de água são mais intensas do que entra as…

cristais de gelo. Água que solidifica na atmosfera freqüentemente sob a forma de cristais hexagonais. Algumas vezes os cristais de neve aparecem com o céu livre de nuvens, uma vez que podem formar-se espontaneamente ou em presença de núcleos de sublimação convenientes, antes que a quantidade de vapor d’água na atmosfera seja suficiente para a formação daquelas. As partículas de neve que chegam ao solo têm formas e tamanhos muitos variados, algumas vezes a olho nu, tenham aspecto…

ELETROFORESE As moléculas de interesse bioquímico apresentam cargas elétricas Grande parte das pesquisas atuais em biologia estuda aspectos ligados às proteínas e aos ácidos nucléicos. Essas macromoléculas têm uma característica bastante importante: apresentam várias regiões (grupamentos) com cargas elétricas. As proteínas apresentam tanto grupamentos com cargas positivas quanto grupamentos com cargas negativas, provenientes dos aminoácidos que as constituem. As cargas são…