T Cnicas Imunol Gicas II

Técnicas Imunológicas - II
Profª Régia Lira

Araraquara, 13 de março de 2015.

Hemaglutinação

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:

PRINCÍPIO:

Utiliza hemácias de aves e mamíferos que após tratadas com ácido tânico + glutaraldeído adsorvem proteínas e glicoproteínas

(hemácias sensibilizadas)

+
Hemaglutinação passiva positiva

+
Hemaglutinação passiva negativa

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:
MÉTODO:
Lâminas ou placas com fundo em U ou V
Semiquantitativo (diluição do soro-amostra)
30-90 minutos (agitação)
Teste controle com hemácias NÃO sensibilizadas
Baixo custo, fácil obtenção, longo armazenamento


O uso de antígenos purificados aumentam Sensibilidade e Especificidade



Pode detectar IgG/IgM com uso de 2-mercapto-etanol

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:
Em placas

Positivo
(tapete)

Negativo
(botão)

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:
2-mercapto-etanol: desagregação de IgM

+

IgM pentamérica

+

+

IgM desagregada

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:
Tratamento com 2-mercapto-etanol:
Não reagente

Não tratada
Reagente

IgM e/ou IgG

Amostra
Não reagente

IgM

Reagente

IgG

Tratada

Hemaglutinação
INDIRETA - PASSIVA:
IMPORTÂNCIA DIAGNÓSTICA


Infecções por:
Trypanosoma cruzi
Treponema pallidum
Toxoplasma gondii



Detecção de IgM e IgG (níveis de até 0,1 mg/mL).



Pesquisa do fator reumatóide (Waaler-Rose)
Uso de hemácias de carneiro sensibilizadas com IgG.

Hemaglutinação
TESTE DE COOMBS:
Utiliza a hemaglutinação indireta para detecção de anticorpos contra
Antígenos eritrocitários em soro/amostras.
Princípio:
Baseado na capacidade de anticorpos sensibilizarem as hemácias sem aglutiná-las (auto-anticorpos)
 Para haver aglutinação é adicionado um SEGUNDO ANTICORPO (antiglobulina ou Soro Coombs). Um anti-IgG humana
Soro Coombs

Y Y Y

Antiglobulina humana
Anti-IgG, anti-IgM, anti-IgA
Anti-C3b, anti-C3c, anti-C3d

Hemaglutinação
TESTE DE COOMBS DIRETO:
Coombs direto:
1.

Princípio:


Detecção de eritrócitos sensibilizados “in vivo” por