trabalho

A diálise é uma técnica usada para separar as substâncias de uma solução pelas suas diferenças de peso molecular e também pelo princípio da difusão em meio aquoso. Envolve a adição de uma amostra que contém pequenas e grandes moléculas a uma membrana porosa de nitrocelulose ou celulose que posteriormente é imersa em um béquer com grandes quantidades de tampão de baixa força iônica. Moléculas de baixa massa molecular, pequenas, atravessam os poros da membrana semipermeável por difusão, enquanto as macromoléculas ficam retidas em seu interior. Este processo de difusão ocorre tanto da membrana para a solução tampão, quanto da solução tampão para o interior da membrana, até que as concentrações entre as pequenas moléculas do interior e exterior da membrana atinjam um equilíbrio.
As proteínas são as moléculas orgânicas muito abundantes e importantes nas células. Podem ser observadas em diversas partes celulares, uma vez que são essenciais tanto para a estruturas das células, quanto para a realização de suas funções. Desempenham papéis muito importantes, podendo atuar como hormônios. transportadores de membrana, enzimas, entre outros.
Para a determinação, ou dosagem de proteínas, uma variedade de métodos pode ser utilizado para fazê-lo. Os mais conhecidos e utilizados são o método de espectrofotometria no ultra-violeta(UV) e o método de Lowry.
O método de absorção no UV baseia-se no fato de que as proteínas evidencião absorção da região de 280nm (devido a diversos aminoácidos como fenilalanina, cisteína, cistina, metionina, triptofano, histidina e tirosina) e abaixo da região de 220nm (devido a ligação peptídica). No entanto, com a absorção na região de 280nm, quando em pH neutro, somente os aminoácidos tirosina, cistina e triptofano possuirão uma absorbância significativa. As principais vantagens deste método são a não destruição da amostra e o fato de ser um método bastante rápido. No entanto, este método está sujeito a interferências, uma vez que qualquer