Separação de Leucócitos

INSTITUTO FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO - IFES
TÉCNICO EM BIOTECNOLOGIA – TBVV3

BRUNO DEPOLO
ELLIAN IZABELY LOUREIRA
LIAN DE SOUZA SILVEIRA
LUIZ ANTÔNIO
TIAGO DE JESUS

Prática n° 3 (18/05/15):

SEPARAÇÃO DE LEUCÓCITOS

Disciplina: Técnicas de Análise em Saúde
Professora: Marcella Leite Porto

VILA VELHA
2015
1. INTRODUÇÃO

A lise das hemácias pode ocorrer devido a lesões durante a estocagem do concentrado de hemácias ou por trauma mecânico no processo transfusional, podendo levar o paciente à exposição de efeitos deletérios da molécula de hemoglobina livre no plasma.¹. Os leucócitos podem ser analisados no sangue total com anticoagulante ou podem ser isolados pelo uso da centrifugação por gradiente de densidade. O sangue total evita as alterações celulares associadas à centrifugação por gradiente de densidade. Geralmente, os eritrócitos são removidos pela adição de tampão de lise de hemácias. (WEISS, 2002).
A utilização da lise do sangue total, visto que os métodos de separação de células linfocitárias por diferença de gradiente de densidade pelo Ficoll ou Histopaque requerem maior volume de sangue e as alterações nas subpopulações linfocitárias são maiores (PAXTON et al., 1989)
Histopaque é uma solução de polissacarídeo em um meio de contraste radiopaco (diatrizoato de sódio). Baixa viscosidade de Ficoll é utilizado para o procedimento de isolamento de linfócitos que envolve um curto, centrifugação a baixa velocidade. Uma solução de Ficoll e diatrizoato de sódio de densidade adequada e a resistência osmótica é colocada num tubo na qual é centrifugado. O sangue é fica depositado camadas em cima, e o sistema de duas fases é centrifugada a uma velocidade baixa durante um curto período de tempo².O Ficoll é o reagente mais utilizado para separação de células mononucleares humanas, de sangue periférico, medula óssea e sangue de cordão umbilical, por densidade de gradiente de centrifugação.
Tampão fosfato-salino ou (abreviado PBS do