Relatorio Biotec

INSTITUTO DE QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUÍMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL

Prática nº 1: Espectrofotometria

Rio de Janeiro
2010

1. Introdução

Os métodos espectroscópicos baseiam-se na absorção e/ou emissão de radiação eletromagnética por muitas moléculas, quando os seus elétrons se movimentam entre níveis energéticos. A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho, que abrangem faixa de comprimento de onda de cerca de 380nm a 800nm. A partir da absorção de radiação por substâncias, pode-se determinar quantitativamente parâmetros como sua concentração, por exemplo. Para isso, utilizamos um aparelho chamado espectrofotômetro (Fig.1), que consiste em fazer passar um feixe de luz monocromática através de uma solução ou suspensão, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa solução ou suspensão.

Fig.1 Esquema óptico dos principais componentes do espectrofotômetro: (a) fonte de luz, (b) colimador, (c) prisma ou rede de difração, (d) fenda seletora de X, (e) compartimento de amostras com cubeta contendo solução, (f) célula fotelétrica, (g) amplificador. A intensidade de radiação absorvida por uma solução ou suspensão está relacionada a uma quantidade denominada Absorvância (Abs):

Abs = log I , sendo I denominado transmitância (T) I I

Esta intensidade pode ser medida comparando-se à água como solução de referência e considerando-se que esta última não absorve radiação. A Absorvância de uma solução ou suspensão é proporcional à concentração da mesma (c) e à distância (d) percorrida pelo feixe luminoso através da solução segundo a Lei de Lambert-Beer:

Abs = Kcd ,

onde k é o coeficiente de absorção e corresponde à absorvância de uma solução de concentração unitária, por unidade de distância percorrida.

2. Objetivo

O objetivo desta aula prática foi de treinamento na