relat

2. Objetivo
2.1 Determinação do pka da glicina
A aula prática teve o intuído de analisar a eficiência do efeito tampão sobre a glicima, baseando-se no valor do pKa da mesma a cada interação. Por fim, concluir os resultados obtidos, construindo uma curva de titulação.
2.3 Determinação da atividade da arginase e inibição enzimática
O experimento realizado teve o intuito de determinar a quantidade de proteínas solúveis em um meio aquoso,utilizando o método de biureto.

3. Metodologia
3.1 Determinação do pka da glicina
Inicialmente, mediu-se o valor de uma solução de glicina 100 mM, que estava em um béquer, utilizando um pH metro e anotou-se o resultado obtido.
Com o auxílio de uma pipeta automática, acoplada com uma ponteira, mediu-se cerca de 100 uL de NaOH 10 M e adicionou-se na solução de Glicina, sendo que novamente anotou-se o resultado. O experimento foi repetido vinte e uma vezes, assim o pH atinjiu um valor valor ≥ 12.
3.3 Determinação da atividade da arginase e inibição enzimática

O experimento foi realizado com um microtubo de 1,5 mL escrito CP, com um outro microtubo de 1,5 mL escrito TI e com outros 5 tubos de ensaio , sendo que no primeiro foi escrito T1, no segundo T2 e assim por diante. Inicialmente pipetou-se, usando uma pipeta automática com uma ponteira, todos os reagentes da bancada, exceto a enzima, em alguns microtubos. A tabela a baixo esquematiza o experimento realizado.
Tabela 1: Preparo da reação enzimática e controle da reação.

Controle Positivo
(tubo CP)
Controle Negativo
(tubo CN)
Inibição
(tubo TI)
L-Arg 500 mM pH 9,5
200 μL
200 μL
200 μL
Inibidor
0
0
200 μL
Água
300 μL
300 μL
100 μL
Enzima Arginase
10 μL
0
10 μL

Em seguida adicionou-se a enzima no tubo TI e CP, sendo que ambos foram imediatamente incubados a 37o C por 15 minutos.

Enquanto esperava-se o tempo de incubação, nos tubos marcados de T1 a T5, foram pipetados, usando a pipeta automática com sua ponteira, 1000 μL de Reagente 1